قياس نسبة الهيموجلوبين في الدم

قياس نسبة الهيموجلوبين في الدم

مقدمة

ويمكن تقدير تركيز الهيموجلوبين (Hb) بقياس لونه وقدرته على الامتزاج مع الأكسجين أو أول أكسيد الكربون أو بما يحتويه من الحديد. وتتلخص الإجراءات التي يمكن وصفها على أنها جميع الأساليب المطابقة للون أو كثافة الضوء، والتي تقيس أيضًا، بدرجات متفاوتة، أي من المتهيموغلوبين أو السلفهيموغلوبين (SHb) التي قد تكون موجودة.

الأهمية السريرية

يتم إجراء هذا الاختبار للكشف عن ما إذا كان المريض يعاني من فقر الدم أو بالأحرى ارتفاع تركيز الهيموغلوبين كما هو الحال في حالة كثرة كريات الدم الحمراء .

القاعدة:

لقياس تركيز الهيموجلوبين في الدم (Hb)، يتم إضافة حجم معروف من الدم المختلط بالكامل بعناية إلى مخفف يعمل على تحليل الكريات الحمراء لإنتاج محلول الهيموجلوبين؛ ويحدث هذا التحلل نتيجة نقص ضغط المخفف. ثم يتم تحديد الهيموجلوبين (Hb) من خلال تماص الضوء (الكثافة البصرية) لمحلول الهيموجلوبين أو مشتقاته في طول موجة محدد.

العينات

تم منع تخثر الدم الوريدي أو الشعيري أو الذي يتدفق بحرية باستخدام: حمض الخليك الرباعي ثنائي أمين الإيثيلين (EDTA).

الأواني الزجاجية والمعدات

أنابيب EDTA، مستوزع أو ممص مكروي، أنابيب اختبار، مقياس الطيف الضوئي أو مقياس الألوان. 

إجراء سيانيد الهيموجلوبين (سيانميتهيموغلوبين)

إجراء سيانيد الهيموجلوبين (سيانميتهيموغلوبين) هو الإجراء الموصى به دوليًا لتحديد تركيز الهيموجلوبين في الدم. وأساس الإجراء هو تخفيف الدم في محلول يحتوي على سيانيد البوتاسيوم وفيروسيانيد البوتاسيوم. يتم تحويل الهيموجلوبين وتثبيط التراص الدموي (Hi) وكربوكسي هيموغلوبين (HbCO) وليس سلفهيموغلوبين (SHb) إلى سيانيد الهيموجلوبين (HiCN). ثم يتم قياس مدى امتصاص المحلول بمقياس الطيف في طول موجة تبلغ 540 نانومتر أو مقياس ألوان كهرضوئي مع مرشح أصفر - أخضر.

الكواشف:

مخفف

يضم كاشف محلول (درابكين) الأصلي درجة حموضته 8.6. يحتوي المحلول المعدل التالي، وهو عبارة عن كاشف من نوع درابكين مطابق لمواصفات اﻟﻤﺠﻟس اﻟدوﻟﻲ ﻟﻟﺘوﺤﻴد اﻟﻘﻴﺎﺴﻲ ﻓﻲ ﻤﺠﺎل ﻋﻟم اﻟدم، على درجة حموضة تتراوح من 7.0 إلى 7.4. فمن الأقل احتمالاً أن يتسبب في حدوث تعكر نتيجة ترسب بروتينات البلازما ويتطلب وقتاً أقصر في عملية التحويل (من 3 إلى 5 دقائق) عن محلول درابكين الأصلي، ولكن له مساوئ تتمثل في أن المخفف ينتج عنه مزبد:

فيري سيانيد البوتاسيوم (0.607 ملي مول / لتر)       200 ملجم

سيانيد البوتاسيوم (0.768 ملي مول / لتر)    50 ملجم

فوسفات البوتاسيوم ثنائية الهيدروجين (1.029 ملي مول / لتر)        140 ملجم

منظف غير آيوني       1 مل

ماء مقطر أو مزال الأيونات     إلى 1 لتر

 

 

ينبغي أن تتراوح درجة الحموضة من 7.0 إلى 7.4 ويجب فحصها باستخدام جهاز قياس pH على الأقل مرة واحدة في الشهر. ينبغي أن يكون المخفف نظيف ولونه أصفر شاحب. عندما تقاس القيمة بالمقابلة مع ماء تعمل كمادة غير فعالة بمقياس الطيف في طول موجة تبلغ 540 نانومتر، يجب أن تكون قيمة التماص صفر. في حال تخزين المحلول في قارورة بنية من زجاج البوروسيليكات، فإنه يتم الاحتفاظ به لعدة أشهر. إذا كانت درجة الحرارة المحيطة أعلى من 30 درجة مئوية، ينبغي تخزين المحلول في ثلاجة، على أن يتم نقله إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. يجب عدم تركه حتى يتجمد. يجب عدم استخدام الكاشف إذا تعكر أو في حالة اكتشاف أن درجة الحموضة ستكون خارج المدى الذي يتراوح من 7.0 إلى 7.4 أو إذا كان يحتوى على درجة تماص أخرى غير صفر في 540 نانومتر مع ماء يعمل كمادة غير فعالة.

الإجراءات

قم بتخفيف عينة الدم بتخفيف 1 في 201 عن طريق إضافة 20 ميكروليتر دم إلى 4 مل من المخفف أو وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.   ضع سدادة مطاطية على الأنبوب الذي يحتوي على المحلول وقم بقلبه عدة مرات. ضع عينة الاختبار في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق على الأقل (لضمان اكتمال عملية تحويل الهيموغلوبين إلى سيانيد الهيموغلوبين) ثم قم بصبه في كفيت وقراءة قيمة التماص بمقياس طيف عند 540 نانومتر أو في مقياس ألوان كهرضوئي باستخدام مرشح مناسب بالمقارنة مع ماء يعمل كمادة غير فعالة. يجب قياس قيمة التماص لعينة الاختبار في غضون 6 ساعات منذ بداية عملية التخفيف. كذلك يجب مقارنة قيمة التماص لمعيار سيانيد الهيموغلوبين (HiCN) المتاح تجاريًا (المنقول إلى درجة حرارة الغرفة إذا تم تخزينه مسبقًا في ثلاجة) بماء يعمل كمادة غير فعالة بنفس مقياس الطيف أو مقياس الألوان الكهرضوئي كما هو الحال في عينة المريض. ينبغي أن يوضع المعيار في الظلام، ولضمان تجنب حدوث تلوث، ينبغي التخلص من أي محلول غير مستخدم في نهاية اليوم الذي يتم فيه فتح الأمبولة.

حساب تركيز الهيموغلوبين

إعداد الرسم البياني القياسي والجدول القياسي

عند اختبار العديد من عينات الدم، فمن الملائم قراءة النتائج من رسم بياني قياسي أو جدول قياسي يتعلق بقراءات قيمة التماص إلى نسبة الهيموغلوبين جم /لتر للأدوات الفردية. وينبغي إعداد هذا الرسم البياني في كل مرة يتم فيها استخدام مقياس ضوئي جديد أو عند استبدال البصلة أو أي مكونات أخرى. ويمكن إعداده على النحو التالي:

إعداد خمسة مخففات لمعيار سيانيد الهيموغلوبين (HiCN) المرجعي (أو إعداد مكافئ) (منقول إلى درجة حرارة الغرفة) مع استخدام كاشف سينايد - فيري سيانيد وفقًا للجدول أدناه وذلك لأنه سيتم استخدام الرسم البياني لتحديد قياسات الهيموغلوبين، ومن الضروري تنفيذ المخففات بدقة.

 

مخففات المحلول المرجعي لسيانيد الهيموغلوبين (HiCN) لإعداد الرسم البياني القياسي

الأنبوب الهيموغلوبين [*] (%)         حجم سيانيد الهيموغلوبين (HiCN) (ملي لتر)         حجم الكاشف (ملي لتر)

1       100 (أقصى حد)       4.0 (غير ممزوج)     لا يوجد

2       75     3.0    1.0

3       50     2.0    2.0

4       25     1.0    3.0

5       0       لا يوجد 4.0 (غير ممزوج)

*       بناء على النسبة المئوية للهيموغلوبين في المحلول المرجعي.

 

يجب تخطيط تركيز الهيموغلوبين للإعداد المرجعي في كل أنبوب بالمقارنة مع قياس قيمة التماص. على سبيل المثال، إذا كان الملصق على الإعداد المرجعي ينص على أنه يحتوي على 800 ملجم/لتر (على سبيل المثال 0.8 جم/لتر) ويستخدم إجراء قياس الهيموغلوبين مخفف بنسبة 1:201، فإن تركيز الهيموغلوبين للأنابيب من 1 إلى 5 سيكون 160 جم/لتر و120 جم/لتر و80 جم/لتر و40 جم/لتر وصفر على التوالي.

باستخدام ورقة رسم بياني خطية، قم بتخطيط قيم التماص على المحور الرأسي وقيم الهيموغلوبين على المحور الأفقي. وينبغي أن تندرج النقاط في خط مستقيم يمر من خلال الخط الأصلي. ومع الأخذ في الاعتبار أن المعيار قد تم تخفيفه بشكل صحيح، فإن هذا يقدم إشارة بأن معايرة المقياس الضوئي هي معايرة خطية. ومن الرسم البياني، يمكن إنشاء جدول بالقراءات وقيم الهيموغلوبين المتناسبة. ويعد هذا أكثر ملاءمة من قراءة القيم من رسم بياني عند إجراء أعداد كبيرة من القياسات. من الأهمية بمكان عدم تغير أداء الأدوات وأن تظل معايرتها ثابتة فيما يتعلق بقياسات الهيموغلوبين. ولضمان ذلك، ينبغي قياس الإعداد المرجعي على فترات متكررة، ويفضل أن يكون ذلك مع كل دفعة من عينات الدم.

معلومات إضافية

عدم الدقة في تقدير نسبة الهيموغلوبين (Hb) اللازمة للحالات التالية ترجع إلى:

إظهار تحويل كربوكسي هيموغلوبين إلى ميتهيموغلوبين يؤدي إلى المغالاة في تقدير الهيموغلوبين (Hb) إذا تم قراءة الاختبار في غضون 3 دقائق، حيث أن كربوكسي هيموغلوبين يمتص الضوء عن درجة 540 نانومتر بأكثر من ما يمتصه سيانميتهيموغلوبين. من الممكن التغلب على تلك الصعوبة عن طريق إطالة وقت رد الفعل إلى 30 دقيقة قبل القراءة. ومن الممكن استخدام الفرق بين قراءات 5 و 30 دقيقة كإجراء نصف كمي لتقدير النسبة المئوية للكربوكسي هيموغلوبين (HbCO) الموجود في الدم.

مقياس الطيف الضوئي والمقياس الضوئي كلاهما حساس لتأثير التعكر، الأمر الذي قد يتسبب نتيجة ارتفاع نسبة كريات الدم البيضاء (WBC) أو ارتفاع نسبة تركيز الدهن أو  بروتينات البلازما أو كريات حمراء غير ذائبة. ويتسبب التعكر الزائد في تقدير مرتفع بصورة غير طبيعية للهيموغلوبين (Hb).

عندما تكون كريات الدم البيضاء (WBC) مرتفعة، فإن تأثيرات العكر تكون مخادعة نتيجة تنبيذ أو ترشيح المحلول قبل قراءة قيمة التماص.

عندما يكون العكر ناتج عن مستوى مرتفع من بروتينات البلازما، فمن الممكن إزالته عن طريق إضافة إما كربونات البوتاسيوم أو إسقاط 25% من محلول الأمونيا.

عندما يكون العكر ناتج عن فرط شحميات الدم، يتم إعداد مادة غير فعالة من المخفف وبلازما المريض أو إزالة الشحم باستخدام استخراج‎ الأثير الثنائي الإيثيل‎ والتنبيذ.

حساب تركيز الهيموغلوبين

 

 

 

المدى المرجعي

الهيموغلوبين

رجال   150 ± 20 جم/لتر

سيدات 135 ± 15 جم/لتر

الوحدات

جم / لتر ، ملجم/ ديسيلتر