Search This Blog

جارٍ التحميل...

الاثنين، 21 نوفمبر، 2016

صبغ اللطاخات

صبغ اللطاخات

صبغة جرام
تصنف الكائنات الحية وفقًا لتفاعلها مع صبغة جرام. تحتوي البكتيريا موجبة الجرام على طبقات ببتيدوغليكان أكثر سمكًا وأكثر كثافة في جدران خلياها. يخترق اليود جدران الخلية في هذه البكتيريا ويغير الصبغة الزرقاء ليمنع انتشارها من خلال جدران الخلية في أثناء عملية إزالة اللون. يجب توافر بكتيريا موجبة الجرام جدران خليتها سليمة لإنتاج تفاعل موجب. يتم صبغ الخلايا سلبية الجرام التي لا تحتفظ بالبنفسج الميثيل/البلوري بلون متباين 26. وقد يستخدم الأحمر المحايد أو صبغة الصفرانين أو الكربول فوكسين كلون متباين.
طريقة جرام لفحص اللطخات
1.     تُحضر اللطخة وتسخن بلطف حتى تثبت.
2.     تغمر الشريحة بالبنفسج الميثيل/البلوري 0.5% وتترك لمدة 30 ثانية.
3.     ُتُميل الشريحة ويوضع عليها محلول اليود لوكول (1%) بقدر كافٍ لغسل الصبغة وتغطى بمحلول جديد من اليود وتترك للتفاعل لمدة 30 ثانية.
4.     تُميل الشريحة وتغسل من اليود باستخدام إيثانول أو أسيتون ذات تركيز 95 - 100% حتى ينتهي اللون لتجف اللطخة.
5.     تشطف بالمياه.
6.     يوضع عليها ملون مباين 0.1% (أحمر محايد أو صبغة الصفرانين أو الكربول فوكسين) وتترك للتفاعل لمدة دقيقتين تقريبًا.
7.     تغسل بالمياه وتجف اللطخة.
التفسير
النتيجة الإيجابية:     
تلون الكائنات الحية موجبة الجرام بلون أرجواني / أزرق غامق.
النتيجة السلبية
تلون الكائنات الحية سلبية الجرام بلون قرنفلي / أحمر.
مراقبة جودة الكائنات الحية
قد يستخدم المستنبت المغذي الذي يحتوي على كائنات حية موجبة الجرام وسلبية الجرام لمراقبة الجودة.
صبغة تسيل-نلسن (لعصيات صامدة للحمض)
يستخدم هذا الأسلوب في الصبغ لتوضيح وجود عصيات صامدة للحمض والكحول (AAFB) تحتوي على أغلفة شمعية تجعل من الصعب إجراء عملية الصبغ أو إزالة اللون. ويعد الصبغ باستخدام صبغة اورامين رومدامين أكثر حساسية من صبغة تسيل-نلسن وبالتالي تكون مناسبة أكثر لتقييم اللطخات من العينات السريرية. يوفر التلون باستخدام صبغة تسيل-نيلسن تفاصيل مورفولوجية ويعد أكثر فائدة لتأكيد وجود AAFB في المستنبتات المغذية الإيجابية.
الطريقة
1.     تغمر الشريحة بمحلول كربول فوكسين قوي.
2.     تسخن الشريحة بلطف، وبمجرد "انبعاث بخار منها" تترك لمدة تتراوح من 3 إلى 5 دقائق.
3.     تشطف بالمياه.
4.     يزال اللون لمدة تتراوح من دقيقتين إلى ثلاث دقائق باستخدام محلول حمض وكحول (3% الحجم بالحجم)، وتشطف بالمياه، وبعدئذٍ يستبدل بمحلول حمض وكحول جديد لمدة تتراوح من ثلاث إلى أربع دقائق حتى يظل لون الشريحة قرنفلي خافت.
5.     تشطف بالمياه.
6.     تلون بلون مباين باستخدام أزرق المثيلين أو أخضر الملاكيت (1% الوزن بالنسبة للحجم) لمدة 30 ثانية.
7.     تشطف بالمياه وتترك حتى تجف.
8.     تغمر بالزيت وتقرأ باستخدام مجهر ضوئي نافذ.
ملاحظة: تتبع إجراءات جهة التصنيع إذا كانت المجموعة مستخدمة تجاريًا.
التفسير
النتيجة الإيجابية:
يختلف طول العصيات صامدة للحمض من 0.5 إلى 10 ميكرومتر وتتلون بلون أحمر. وقد يظهر بعضها سبحي.
النتيجة السلبية
تتلون جميع الكائنات الحية الأخرى والمواد الأساسية بلون أخضر إذا كان ملون أخضر الملاكيت المباين مستخدمًا أو بلون أزرق إذا كان ملون أزرق المثيلين المباين مستخدمًا.
مراقبة الجودة
عنصر التحكم الإيجابي.
أنواع المتفطرة
عنصر التحكم السلبي: قد تستخدم لطخة سلبية مثبتة كعنصر تحكم سلبي.

أغار ماكونكي

أغار ماكونكي (MAC)
أغار ماكونكي (MAC) عبارة عن مستنبت بالصحيفة تفريقي يوصى به للاستخدام في استفراد والتفريق بين البكتيريا المعوية سلبية الجرام غير المخمرة للاكتوز والأحياء المخمرة للاكتوز. تظهر مستعمراتالشيغيلة في أغار MAC كمستعمرات محدبة عديمة اللون ويبلغ قطرها من 2 إلى 3 مم تقريبًا. وقد تكون مستعمرات الشيغيلة الزحارية1 أصغر حجمًا. وتكون المستعمرات  الشيغيلة التيفية مسطحة الشكل وعديمة اللون ويبلغ قطرها عادة من 2 إلى 3 مم. يتوفر العديد من العلامات التجارية لـ MAC. وتقوم معظم شركات التصنيع بتحضير العديد من تركيبات MAC، والتي قد تختلف في الانتقائية وتأثير العلاج على استفراد الشيغيلة على سبيل المثال، بعض تركيبات MAC لا تحتوي على
البنفسجية المتبلورة، عامل انتقائي: هذه الأنواع ليست انتقائية ولا ينبغي استخدامها في استفراد الشيغيلة. ويعد أغار ماكونكي Oxoid رقم 3 وأغار ماكونكي Difco Bacto  وأغار ماكونكي BBL أنواع مناسبة للاستفراد.
‌أ.      يُحضر MAC وفقًا لتعليمات الجهة المصنعة. ‎‎ملاحظة:‎‎ يمكن أيضًا تحضير MAC من المكونات الفردية، ولكن يؤدي هذا إلى الكثير من الاختلافات أكثر من تحضير تركيبة منزوعة المياه متوفرة تجاريًا].
‌ب.    يُعقم المستنبت من خلال التعقيم بالبخار عند درجة حرارة 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
‌ج.     يُبرد ليصل إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية ويوضع في أطباق بتري (ذات عمق موحد يتراوح من 3 إلى 4 مم).
‌د.      يترك الغطاء مفتوحًا جزئيًا لمدة 20 دقيقة تقريبًا لكي يجف سطح الأغار. ويغلق الغطاء وتخزن الأطباق عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد. وإذا تم تخزين الأطباق لأكثر من بضعة أيام، فينبغي وضعها في حقيبة من البلاستيك محكمة الإغلاق لمنع جفافها.
مراقبة الجودة لمراقبة جودة MAC، ينبغي أن تكون الكائنات الحية التالية كافية لتأكيد انتقائية خصائص النمو وتثبيطها.
ينبغي أن تنتج الإشريكية القولونية مستعمرات يتراوح لونها من القرنفلي إلى الأحمر بالإضافة إلى بيئتها الجيدة لنمو ممتاز؛ و
ينبغي ان تنتج الشيغيلة الفلكسنرية مستعمرات عديمة اللون بالإضافة إلى بيتها معقولة لنمو جيد، إلا أنه قد تكون مستعمرات الشيغيلة الزحارية 1 أصغر حجمًا.
أغار مولر هينتون
أغار مولر هينتون عبارة عن مستنبت موصي به لـ NCCLS يستخدم لاختبار حساسية مضاد المكروبات الموحدة لبعض البكتيريا؛ وأن الكائنات الحية الواردة في هذا المستند المناسبة لاستخدام تركيبة مستنبت مولر هينتون( بمعنى آخر, مولر هينتون غير مكمل) عبارة عن الشيغيلة التيفية والشيغيلة spp وضمة الكوليرا.
‎‎ملاحظة:‎‎ يتوفر العديد من تركيبات أغار مولر هينتوت تجاريًا.
يوصي دليل المختبر بأنه لا ينبغي تحضير أغار مولر هينتون من مكونات فردية لأن هذا قد يقلل من الجودة. ويتم مراقبة جودة مولر هينتون المنزوع المياه المتوفر التجاري بعناية قبل
طرحه للبيع].
‌أ.      تتبع إرشادات جهة التصنيع لتحضير المستنبت.
‌ب.    بعد تعقيم المستنبت بالبخار، يبرد إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية في حام مياه.
‌ج.     يقاس من 60 إلى 70 مل من المستنبت لكل طبق ويوضع في أطباق 15 × 150 مم، أو يقاس من 25 إلى 30 مل من المستنبت لكل طبق ويوضع في أطباق 15 × 100 مم. ينبغي وضع الأغار في قارورة منبسطة القاع أو أطباق بتري بلاستيكية على سطح مستوٍ ذات عمق موحد يتراوح من 3 إلى 4 مم. وسوف يؤثر استخدام أكثر من أغار أو أقل على نتائج الحساسية. قد يؤدي الأغار الذي يبلغ عمقه أكثر من 4 مم إلى نتائج مقاومة للخطأ، في حين أن الأغار الذي أقل من 4 مم قد يقترن بتقرير حساسية خطأ.
‌د.      قد تستخدم الأطباق التي تم تحضيرها مؤخرًا في نفس اليوم أو تخزن في ثلاجة (عند درجة حرارة تتراوح من درجتين إلى 8 درجات مئوية) لمدة أسبوعين. وإذا لم تستخدم الأطباق في غضون سبعة أيام من تحضيرها، فينبغي تغليفها بالبلاستيك للحد من تبخرها. وإذا كانت توجد رطوبة بإفراط قبل الاستخدام على السطح، فينبغي وضع الأطباق في حاضنة ( من 35 إلى 37 درجة مئوية) حتى تتبخر الرطوبة (تستغرق عادة من 10 إلى 30 دقيقة).
لا ينبغي ترك الأغطية مفتوحة جزئيًا لأنه قد يتلوث المستنبت بسهولة.
مراقبة الجودة ينبغي مراقبة جودة كل دفعة جديدة من أغار مولر هينتون قبل الاستخدام من خلال اختبار سلالة القياسية الإشريكية القولونية ATCC 25922 لاختبار حساسية مضادة المكروبات. (كما يمكن أيضًا استخدام تركيبة أغار مولر هينتون لاختبار الكائنات الهوائية موجبة الجرام، التي يمكن استخدامها في حالة  العنقودية الذهبية ATCC 25923  كسلالة مراقبة جودة) ينبغي أن تتراوح درجة حموضة كل دفعة جديدة من مولر هينتون من 7.2 إلى 7.4؛ وإذا كانت درجة الحموضة ليست ضمن هذا النطاق، فلا ينبغي تعديل درجة حموضة المستنبت من خلال إضافة حمض أو قاعدة، بمعنى آخر، ينبغي التخلص من دفعة أطباق مولر هينتون وتحضير دفعة جديدة من الأطباق. وإذا كانت درجة حموضة كل دفعة مرتفعة للغاية أو منخفضة للغاية، فينبغي إعادة دفعة المستنبت منزوع المياه بأكملها إلى جهة التصنيع لأنها غير ملائمة. يتم تضمين قيم أحجام منطقة التثبيط / التركيز التثبيطي الأدنى (MIC) لمراقبة الجودة في قسم اختبار حساسية مضاد المكروبات بفصل مسببات الأمراض.
مستنبت كاري-بلير ومستنبت أميز ومستنبت ستيورات
يُجرى تحضير كل مستنبت من مستنبتات النقل وفقًا لإرشادات جهة التصنيع. ‎‎ملاحظة:‎‎ يتوفر العديد من تركيبات كاري-بلير منزوعة المياه تجاريًا؛ يتطلب بعضها لإضافة كلوريد الكالسيوم والأخر لا يتطلب هذا]. كما يمكن أيضًا تحضير هذه المستنبتات من مكونات فردية؛ ومع ذلك، من الصعب للغاية مراقبة جودة الدفعة بشكل جيد ولذلك يوصي هذا الدليل بشرائها من جهة التصنيع. عند تحضير مستنبت كاري-بلير، فينبغي توزيعه في حاويات بحجم كافٍ ولذلك يتم تغطية المسحات بمعدل 4 سم من المستنبت على الأقل. على سبيل المثال، يمكن توزيع كمية تتراوح من 5 إلى 6 مل في أنابيب 13 × 100 مم ذات سدادة لولبية. وعند فك السدادة، يمكن تعقيم المستنبت بالبخار (وليس بالتعقيم) عند درجة حرارة 100 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. وينبغي إحكام غلق السدادة بعد التعقيم وتخزين المستنبت عند درجة حرارة تتراوح من 15 إلى 30 درجة مئوية.
هذه المستنبتات مستقرة تمامًا إذا كانت مخزنة في حاويات محكمة الإغلاق في مكان بارد ومظلم بحيث لا يجف المستنبت. يمكن استخدام جميع المستنبتات لمدة تصل إلى سنة واحدة ما دام لم يتم ملاحظة أيّ فقدان في الكمية أو تلوث مرئي (مثل، أجسام غريبة أو نمو بكتيري) أو تغير لون. ينبغي رذاذ مستنبت الأميز، الذي تم تحضيره وتخزينه لمدة تزداد عن 9 أشهر، ببخار رطب وإعادة تعليقه بالفحم قبل الاستخدام.

اختبار اكتشاف المستضد المرئي السريع الخاص بضمة الكوليرا


اختبار اكتشاف المستضد المرئي السريع الخاص بضمة الكوليرا
لدى سلالات ضمة الكوليرا المنتمية إلى الزمرات المصلية O1 وO139 القدرة على التسبب في الكوليرا الوبائية وجائحة الكوليرا. تنقسم الزمرة المصلية O1 فرعيًا إلى نمطين مصليين وهما أوغاوا وإينابا. إن الزمرة المصلية O139 التي ظهرت في الهند عام 1992 قد انتشرت سريعًا بين كل الدول الآسيوية وتعتبر ثامن سلالة جائحة كامنة للكوليرا. وللتشخيص الفوري للكوليرا أهمية كبرى في بدء علاج فعال وتأسيس تدابير وبائية مناسبة. هناك مؤشرات نهائية تقول بأن معدل وقوع هذه الزمرة المصلية في أعلى مستوياته داخل الهند وبنجلاديش.
قد أجرى وصف العديد من الاختبارات التشخيصية السريعة لاختبار الكوليرا. اكتشفت بعضها ذيفان الكوليرا. واكتشفت الأخرى مستضد عديد السكاريد الشحمي (LPS) لضمة الكوليرا O1 أو O139.
مؤخرًا، قد تم أيضًا تطوير المقايسة المناعية متعددة الخطوات بمقياس اللون القائم على الذهب الغراوني المعروفة باسم SMART  للكشف المباشر عن ضمة الكوليرا O1 أو ضمة الكوليرا O139 في عينات البراز وأظهرت أن الحساسية %95 والنوعية %100 لسلالة O1 والحساسية 100% والنوعية 97% لسلاسة O139.
الأهمية السريرية
من الناحية السريرية، قد تتراوح الكوليرا من الاستعمار عديم الأعراض إلى الإسهال الحاد مع فقد كبير في سوائل الجسم، مما يؤدي إلى الإصابة بالجفاف واضطرابات الكهارل والوفاة. 
القاعدة
هذا الاختبار عبارة عن اختبار اكتشاف المستضد المرئي السريع للاستشراب المناعي الخاص بضمة الكوليراباستخدام عينات من البراز. غشاء النيتروسليلوز مغلف بالأجسام المضادة أحادية التسيلة ضد مستضد عديد السكاريد الشحمي (LPS) لضمة الكوليرا O1 وO139 كشريطين متميزين. عند تدفق عينة الاختبار من خلال غشاء النيتروسليلوز، تقترن جسيمات الذهب الغرواني مع الأجسام المضادة أحادية التسيلة ضد مستضد عديد السكاريد الشحمي (LPS) لضمة الكوليرا O1 وO139 المرتبطة بالمسضدات ذات الصلة من عينة الاختبار، إذا كانت موجودة. يتحرك المعقد الضدي المستضدي عبر غشاء النيتروسليلوز ويرتبط بالأجسام المضادة الثابتة المطابقة المضادة لضمة الكوليرا O1 و/أو O139، ويشكل شريط ماجنتا أحمر اللون، والذي يؤكد على وجود نتائج إيجابية. يجب أن يظهر شريط اختبار التحكم، بغض النظر عن إيجابية أو سلبية عينة الاختبار، للتحقق من صحة إجراء الاختبار.
المواد والمعدات
في البلدان المعرضة لخطر أوبئة الكوليرا، فإن الخطوة الأولى في المختبر هي الاستعداد لحدوث وباء محتمل. ويجب الاستعداد أو الحصول على المستلزمات والمعدات اللازمة لتحديد ضمة الكوليرا O1 و/أو O139 حتى في الأماكن النائية. وينبغي الاتصال مسبقًا بالمختبر المحلي أو المركز الطبي أو الموقع الميداني الذي سيجرى فيه الاختبار لضمان توفر جميع المستلزمات والمعدات الضرورية ومعدات الوقاية الشخصية (PPE) بسهولة.
المستلزمات والمعدات اللازمة لإجراء الاختبار السريعة مرفقة مع مجموعة أدوات الاختبار السريع:
       غمائس مغلفة على حدة في حقيبة من الألومنيوم مع أنابيب اختبار بلاستيكية مجففة 5 مل تستخدم مرة واحدة فقط لكل عينة.
       ممصات نقل تستعمل مرة واحدة فقط (قطارات بلاستيكية) للبراز.
       حامل أنبوب اختبار الرغوة.
       ملحي نظامي معقم أو ماء مقطر يستعمل مرة واحدة فقط، حاويات نظيفة لجمع عينات البراز.
       رفرف بلاستيك ذات حجم مناسب لأنابيب الاختبار (مقترح).
       ساعة أو مؤقت.
       مستلزمات السلامة البيولوجية / معدات الوقاية الشخصية: قفازات مطاطية أو نظارات واقية أو واقي للوجه
       معطف المختبر.
       إناء مخاطر بيولوجية للفضلات المعدية.
       مطهر.
التخزين
تخزن مجموعة الأدوات الاختبار السريع في درجة الحرارة المحيطة (من 24 إلى 26) درجة مئوية، إلا أنه من المستحسن تخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية عند عدم استخدامها لفترة تمتد إلى ستة أشهر أو أكثر (حسب الجهة المصنعة).
جمع العينات
يجب جمع عينات البراز في مرحلة مبكرة من المرض المعوي، عندما تتواجد مسببات الأمراض عادة في البراز بأرقام مرتفعة وقبل بدء العلاج بالمضادت الحيوية.
تجمع العينات من أشخاص مشتبع في كونهم جزءًا من تفشي المرض وتنطبق عليهم المعايير التالية.
1. المعاناة من "براز شبيه بماء الأرز".
2. ظهور المرض في أقل من أربعة أيام قبل أخذ العينة.
3. عدم تلقي أدوية مضادة للمكروبات لعلاج مرض الإسهال.

تجمع عينات البراز من المرضى وتوضع في حاويات نظيفة (لا تحتوي على بقايا المواد المطهرة أو المنظفة) محكمة الإقفال ومانعة للتسرب. ولا ينبغي عدم جمع العينات من أوعية التبول بالفراش، فقد تحتوي على بقايا مواد مطهرة أو أيّ ملوثات أخرى. وكما ينبغي حفظ عينة البراز في الثلاجة ومعالجتها في غضون مدة أقصاها ساعتين بعد جمعها.
العينات المناسبة
البراز السائل، "براز شبيه بماء الأرز" مثالي - براز سائل صاف، يشبه ماء الأرز المسلوق، يمكن رؤيته بشكل تقليدي في حالات الكوليرا.
 البراز اللزج أو الشبيه بالمخاط أو شبه الصلب — مقبول إلا أنه يجب تخفيفه بسائل قبل استخدامه مع محلول ملحي معقم نظامي أو ماء مقطر.
العينات غير المقبولة:
البراز الصلب— لايوصى به، لأن هذه العينات تحتوي على مواد جسيمية قد تسد غشاء النيتروسليلوز مما يقيد تدفق العينة.
مسحات من المستقيم— لم يُجرى تقييم مقياس الغميسة للاستخدام مع مسحات المستقيم.
الإجراءات


1. ارتداء معدات الوقاية الشخصية: معطف المختبر والقفازات المطاطية والنظارات الواقية وواقي الجلد. ينبغي ارتداء معدات الوقاية الشخصية دائمًا أثناء التعامل مع العينة                     
2. جمع العينات في كوب بلاستيك. وضع ملصق على الكوب مع معرّف المريض     
3. إزالة أنبوب الاختبار 1 من مجموعة الأدوات ووضع أنبوب الاختبار في رفرف ستيايرفوم أو بلاستيك. ووضع ملصق على أنبوب الاختبار.
4. إزالة قطارة البلاستيك 1 من مجموعة الأدوات.
5. ملء القطارة بعينة البراز حتى النصف (من 150 إلى 200 ميكرولتر) وتنقل إلى أنبوب الاختبار. ينبغي عدم وضع سائل أكثر من هذا المقدار في أنبوب الاختبار.                                      
6. فتح علبة الاختبار السريع، ووضع ملصق على الغميسة مع معرّف المريض.
7. وضع الغميسة في أنبوب الاختبار مع توجيه الأسهم للأسفل. ينبغي غمر نهاية الشريط في البراز. ينبغي أن تظل الأسهم أعلى مستوى البراز.                        
8. الانتظار لمدة تتراوح من 15 إلى 20 دقيقة لاستكمال الاختبار. وعند استكمال الاختبار، ينبغي رؤية شريط بالقرب من أعلى الغميسة (شريط تحكم داخلي).     شريط
تحكم داخلي      
9.مراجعة النتائج وتفسيرها في غضون مدة من 15 إلى 20 دقيقة: أ. إيجابية، ضمة الكوليرا O1؛ ب. إيجابية، ضمة الكوليرا O139؛ جـ. إيجابية، كل من ضمة الكوليرا O1 وO139؛ د. سلبية، ضمة الكوليرا O1 وO139؛ هـ. لم يعمل الاختبار بشكل صحيح (اختبار غير صالح). ينبغي عدم تفسير نتائج الاختبار بعد 30 دقيقة.           
      أ       ب        جـ        د         هـ

10.وضع جميع الفضلات في حقيبة بلاستيكية مبطنة تبطين ثنائي وعليها ملصق  "مخاطر بيولوجية".           
الشكل 28: صحيفة إرشادات الاختبار السريع، لتمثيل رسومات بيانية لإجراءات الاختبار

1.السماح بوقت لوصول مجموعة الأدوات إلى درجة حرارة الغرفة قبل فتحها واستخدامها.
2.وضع ملصق على أنبوب الاختبار النظيف غير المستخدم مع رمز تعريف المريض. نقل من 150 إلى 200 ميكرولتر من عينة البراز السائل الخاصة بالمريض إلى أنبوب الاختبار.
ملاحظة: يجب تخفيف العينات اللزج أو الشبيه بالمخاط أو شبه الصلب بمحلول ملحي معقم أو ماء مقطر قبل نقلها إلى أنبوب الاختبار.
3.فتح حقيبة الألومنيوم من عند المنطقة المحززة. وإزالة الغميسة.
4.وضع ملصق على الغميسة مع رمز تعريف المريض، ينبغي توخي الحذر من لمس المنطقة المحدد عليها سهم (منطقة الغمس).
5.وضع الغميسة بعناية في أنبوب الاختبار المحتوي على البراز مع توجيه الأسهم للأسفل. ينبغي غمر نهاية الشريط في البراز. ينبغي التأكد من ثبات الأسهم أعلى مستوى البراز.
6.ترك الغميسة بدون لمسها لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة أو حسب إرشادات الجهات المصنعة.
7.يظهر شريط "تحكم" داخلي أحمر ماجنتا في غضون مدة من 15 إلى 20 دقيقة يشير إلى اختبار صالح؛ يشير هذا الخط إلى اكتمال التفاعل. وجود واحد أو اثنين على الأقل من الخطوط الحماء الماجنتا يشير إلى أن العينة إيجابية بالنسبة  لضمة الكوليرا O1 و/أو ضمة الكوليرا O139.
8.قراءة نتائج الاختبار وتسجيلها في غضون مدة من 15 إلى 20 دقيقة. ينبغي عدم تفسير النتائج بعد 30 دقيقة. (قراءة النتائج وتفسيرها حسب إرشادات الجهات المصنعة).
تفسير النتائج وتقديم تقرير بها
تفسر نتائج اختبار كل غميسة وفقًا لإرشادات الجهة المصنعة.
يمكن العثور على إرشادات تفسير نتائج الاختبار في الجدول (1-1).
تُسجّل جميع نتائج اختبارات المريض في مستند أو دفتر ملاحظات كسجل دائم. وينبغي تسجيل النتائج حسب تصنيفها كنتيجة إيجابية أو سلبية أو غير صالحة. إذا اقتضت الضرورة تكرار الاختبار بسبب أن النتيجة غير صالحة، فينبغي تسجيل النتيجة (غير الصالحة) أولاً وحل المشكلة وتسجيل النتيجة المكررة مرة أخرى. يقدم تقرير بنتائج الاختبار الإيجابية والسلبية إلى الشخص المناسب في الوقت المناسب. وينبغي أن يتضمن التقرير أيّ تعليقات أو معلومات يحتاجها هذا الشخص لتقييم نتائج الاختبار تقيمًا صحيحًا.
الجدول 13: نتائج نتيجة الاختبار المتوقعة للغميسة وتفسير نتائج الاختبار
نتيجة اختبار الغميسة         التفسير
إيجابية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود أ): يظهر شريطين، واحدًا لشريط اختبار التحكم والآخر لتحديد شريط الاختبار لضمة الكوليرا O1 (Vc O1). إشارة إلى أن العينة إيجابية فقط لضمة الكوليرا O1.
إيجابية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود ب): يظهر شريطين، واحدًا لشريط اختبار التحكم والآخر لتحديد شريط الاختبار الخاص بضمة الكوليرا O139 (Vc O139).         إشارة إلى أن العينة إيجابية فقط لضمة الكوليرا O139.
إيجابية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود جـ): يظهر ثلاثة أشرطة، واحدًا لشريط اختبار التحكم، وواحدًا لشريط الاختبار الخاص بضمة الكوليرا O1 (Vc O1)، وواحدًا لشريط الاختبار الخاص بضمة الكوليرا O139 (Vc O139)      إشارة إلى أن العينة إيجابية لكل منضمة الكوليرا O1 وO139.
سلبية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود د): لا يظهر إلا شريط اختبار تحكم واحد. إشارة إلى أن العينة سلبيةلضمة الكوليرا O1 وO139.
غير صالحة (الأشكال 3-1 و3-2، العمود هـ): لا يظهر أيّ أشرطة اختبار تحكم       يشير إلى أن هناك خطأ في الإجراءات أو تعرض العينة/الغميسة للتلف أو وجود مواد جسيمية في العينة تمنع تدفق السائل من خلال غشاء النيتروسليلوز.

مراقبة الجودة
مصدر الخطأ الشائع
العينات التي لم تصنف بأنها "سائلة" قد تسد شريط غشاء النيتروسليلوز، وتحد من تدفق السائل، وتمنع تفاعل الغميسة مما يؤدي إلى عدم صلاحية الاختبار.
وينبغي تخفيف هذه العينات أما بمحلول ملحي معقم أو ماء مقطر أو يتم رفضها كعينات غير مقبول لاختبار.


       أ       ب        جـ        د         هـ
الشكل 29: التفسير المرئي لنتائج اختبار الغميسة السريع

الاحتياطات
ينبغي التأكد من إجراء الاختبار وفقا للإرشادات تمامًا، والالتزام بكل الإجراءات. وتستخدم طريقة تعقيم طوال إجراء الاختبار. بالإضافة إلى ارتداء قفازات مطاطية ونظارات واقية وواقي للوجه ومعطف مختبر عند معالجة واختبار جميع العينات السريرية.
6.7 إعداد المستنبتات
بإمكان المختبر، من خلال عدد قليل من المواد التشخيصية، تقديم مساهمة مهمة لرعاية المرضى الفرديين من خلال التشخيص الدقيقة لمسببات المرض.
في معظم البلدان النامية، يعيق الممارسة المختبرية البكتريولوجية نقص في المستنبتات المغذية والكواشف الأساسية، والتي تكلف أموال طائلة لاستيرادها. ومع ذلك، يمكن تخفيض عدد المستنبتات المغذية والكواشف التي يتعين شراؤها إلى المستنبتات الأساسية، من خلال التحديد المنطقي، كما كان الحال بالنسبة لقوائم الأدوية الأساسية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إنتاج بعض المستنبتات البسيطة
والكواشف أو إعدادها محليًا.
يجب مراقبة جودة كل دفعة من المستنبتات التي يتم إعدادها من المكونات الفردية أو رقم تشغيل الجهة المصنعة المختلف للمستنبتات منزوعة المياه التجارية وكل دفعة من المستنبتات التي يتم إعدادها من المكونات الفردية قبل الاستخدام. يجب اختبار كل المستنبتات بعد إعدادها مباشرةً، حسب الاقتضاء، بالإضافة إلى تصنيف مرجعي
لخصائص النمو السليم كما هو موضح لكل المستنبتات.
ينبغي الاحتفاظ بسجل إعداد جميع المستنبتات أو تواريخ شراؤها ونتائج اختبار مراقبة الجودة، وينبغي الإشارة إلى أيّ خصائص غير مألوفة (مثل، لون المستنبت أو بطء نمو بكتيريا الاختبار). يتطلب العديد من المستنبتات استخدام دم مزال الفبرين.
يجب توزيع المستنبت الأغاري إلى أطباق بتري مقاس 15 × 100 مم أو 15 × 150 مم بعمق موحد من 3 إلى 4 مم؛ سوف يحقق 20 ميليلتر تقريبًا من مستنبت الأغاري السائل هذا العمق في طبق مقاس 15 × 100 مم. إذا تم تبريد الأغار إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية لوضع في الطبق، فيتم تكثيفه إلى أدنى حد. بعد وضع الأغار في الأطباق، ينبغي الحفاظ عليها في درجة حرارة الغرفة لعدة ساعات لمنع التكثيف الزائد من التكوين على أغلفة الأطباق. وهناك وسيلة يتم من خلال خفض التكثيف ذا تمت تغطية الأطباق بحيث تبرد ببطء أكثر. وبدلاً من ذلك، عند
إعداد مستنبتانتقائي (مثل، ماكونكي [MAC]، زيلوز - ليزين - ديوكسي كولات [XLD]، آغارُ الثِيُوسلْفات - سيتْرات - أَمْلاَحِ الصَّفْراءِ السَّكاروزِيّ [TCBS]  وما إلى ذلك)، وتتيح تلك الشروط فرصة ضئيلة بأن المستنبتات المبردة سيتم تلويثها، بعد وضع الأغار في الأطباق، يمكن وضع أغطية على الطبق حيث تترك فتحه صغيرة للسماح بخروج الحرارةً، مما يؤدي إلى تكوين تكثيف أقل على الغطاء العلوي؛ ينبغي أن يظل الغطاء مفتوحًا قليلاً مثل هذا لمدة 30 دقيقة تقريبا،
في حين يتصلب الأغار. ومع ذلك، إذا كان من المحتمل أن يكون الأغار ملوثًا إذا ترك الغطاء مفتوح جزئيا، ينبغي السماح بتصلب الأغار مع الغطاء المغلق.
ملاحظة: تغطية الأغار في حين أنها ما زالت ساخنة سوف يسمح بتكوين قدرًا كبيرًا من التكاثف على الغطاء العلوي. إذا احتوت الأطباق على تكاثف، فيجب تغطيتها في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة للسماح بتبخر التكاثف. وبعد تبخر التكاثف، ينبغي وضع الأطباق في وضع مقلوب وتخزينها في حقيبة من البلاستيك في وضع مقلوب عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
6.7.1 الأغار الدموي: أغار فول الصويا بالتريبتيكاز (TSA) مع دم الأغنام 5%
يستخدم أغار دم الأغنام كمستنبت أغار دم عام ويتكون من TSA بالإضافة إلى دم أغنام بمقدار 5%. يجب أن يظهر طبق أغار دم الأغنام لون أحمر لامع. إذا أظهرت الأطباق لون أحمر داكن، يتم إضافة الدم عندما يكون الأغار ساخنًا للغاية؛ وإذا حدث ذلك، فيجب التخلص من المستنبت وإعداد دفعة جديدة.
‌أ.      يُجرى إعداد TSA وفقًا للإرشادات الواردة على ملصق المسحوق المنزوع المياه. ولمزيد من الراحة، يمكن إعداد 500 مل من الأغار المنصهر في قارورة 1 لتر. ويضاف 2 جرام من الأغار إلى 500 مل من الماء. وتستخدم الحرارة للذوبان.
‌ب.    التعقيم بالبخار عند درجة حرارة 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. والتبريد عند درجة حرارة 60 درجة مئوية.
‌ج.     يضاف 5% من دم الأغنام المعقم مزال الفبرين (بمعنى آخر، يضاف 25 مل من دم الأغنام إلى 500 مل من الأغار). إذا تم إعداد حجم مختلف من المستنبت الأساسي، فيجب تعديل كمية الدم المضافة وفقًا لمعدل 5% (على سبيل المثال، 50 مل من الدم لكل لتر من المستنبت).
‌د.      توزيع 20 مل على أطباق بتري 15 × 100 مم. السماح بتجمد المستنبت وجفافها، ووضعه في حقيبة من البلاستيك وتخزينه عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
مراقبة الجودة ينبغي اختبار كل دفعة جديدة من أطباق أغار الدم أو تم إعدادها حديثًا أو شراؤها لتفاعل النمو وحال الدم مع تصفية العقدية الرئوية. المستعمرات عبارة عن كائنات صغيرة وينبغي أن تظهر في تدرج من الألوان من اللون الرمادي إلى أخضر رمادي محاط بهالة متميزة مائلة إلى اللون الأخضر في الأغار.
6.7.2 أغار الشوكولاتة مع قاعدة TSA وملحق نمو
أغار الشوكولاتة مع ملحق النمو عبارة عن مستنبت يدعم متطلبات نمو خاصة مطلوبة لاستفراد الكائنات الحية الدقيقة (عند التحضين في غلاف جوي من ثاني أكسيد الكربون بمعدل 5%). يحتوي أغار الشوكولاتة على تركيز مخفض من الأغار، مما يزيد من محتوى الرطوبة في المستنبت.
ينبغي أن يدعم أغار الشوكولاتة نمو المستديمة النزلية.
يمكن إعداد ممالات أغار الشوكولاتة للنقل والتخزين قصير الأجل بنفس الطريقة الموضحة لأطباق الأغار، إلا أن يتم توزيع المستنبت في أنابيب 16 × 125 مم ذات سدادو لولبية وينبغي إمالتها قبل التجميد.
‌أ.      يستخدم TSA كمستنبت أساسي. ويتم إعداد قوة مضاعفة (بمعنى آخر، 20 جرام في 250 مل من الماء المقطر). ويجرى بعد ذلك التعقيم بالبخار ويتبعه التبريد إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية ويستخدم مقياس الحرارة للتحقق من درجة حرارة البريد.
‌ب.    إعداد محلول من الهيموغلوبين بنسبة 2%(بمعنى آخر، 5 5 جرام في 250 مل من الماء المقطر). ويخلط الهيموغلوبين في 5 إلى 6 مل من الماء المقطر لتكوين عجينة ناعمة. وتستمر عملية الخلط حتى يتم إضافة جميع المياه. ويجرى بعد ذلك التعقيم بالبخار ويتبعه التبريد عند 50 درجة مئوية.
‌ج.     إضافة محلول الهيموغلوبين إلى TSA ذات قوة مضاعفة ويستمر الاحتفاظ به عند درجة حرارة 50 درجة مئوية.
‌د.      • البديل إلى الخطوات أ-ج: إذا كان محلول الهيموغلوبين ليس متوفرًا، فإن البديل هو إضافة 5% من دم الأغنام المعقم مزال الفبرين أو دم الأرنب أو دم خنزير غينيا أو دم حصان (بمعنى آخر، 5 مل من الدم لكل 100 مل من الأغار) إلى TSA كامل القوة ( بمعنى آخر، 20 جرام في 500 مل من الماء المقطر). ينبغي عدم استخدام الدم البشري. بعد تعقيم المستنبت الأساسي بالبخار وتبريده إلى 50 درجة مئوية، يضاف الدم
‌ه.      ويوضع في حمام ماء ساخن لا تزيد درجة حرارته عن 80 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة أو حتى يصل إلى لو ن الشوكولاتة. وبعدئذٍ يبرد إلى درجة 50 درجة مئوية.
‌و.     بعد إضافة محلول الهيموغلوبين أو الدم مزال الفبرين إلى المستنبت الأساسي وتبريد المستنبت إلى 50 درجة مئوية، يضاف ملحق النمو (على سبيل المثال، IsoVitaleX أوVitox) إلى تركيز نهائي بنسبة 1%. تخلط المكونات بلطف على شكل دائري؛ لتجنب تكوين فقاعات. ويوزع من 15 إلى 20 مل في أطباق بتري 15 × 100 مم.
مراقبة الجودة ينبغي اختبار جميع مستنبتات أغار الشوكولاتة التي تم إعدادها أو شراؤها حديثًا لتحديد سعة المستنبت بغية دعم نمو البكتيريا لتكون مستفردة، ولا سيما المستديمة النزلية. وإذا كان  المستنبت لا يدعم نمو واحدة من البكتيريا أو جميع البكتيريا، فينبغي التخلص من المستنبت وإعداد دفعة جديدة من المستنبتات أو شراؤها.
ينبغي أن يظهر أغار الشوكولاتة بلون بني إلى أحمر قانٍ. وينبغي أن تظهر النيسرية السحائية
والمستديمة النزلية بلون مائل إلى الرمادي، تقريبًا غشاء شفاف على سطح مائل بدون إزالة لون المستنبت بعد 24 ساعة في الحضانة؛ ينبغي أن تظهر العقدية الرئوية  على شكل مستعمرات بلون رمادي إلى أخضر رمادي مع إزالة لون المستنبت المتميز المائل إلى اللون الأخضر.
إذا لم تنمو المستديمة النزلية، فقد يتم فقدان ملحق النمو (IsoVitaleX أو ما يعادله) سهوًا.ج