الاختلاف في أحجام الخلايا الحمراء

 

الاختلاف في أحجام الخلايا الحمراء:

قياس توزيع كريات الدم الحمراء 

تنتج المعدات المؤتمتة منسجات توزيع الحجم التي تسمح بوجود تجمع أو أكثر من الخلايا ليتم تقديرها. قد تقيم المعدات أيضًا النسبة المئوية للخلايا التي تقع أعلى وأسفل حدود حجم الكريات الوسطى المحددة و"تمييز" وجود عدد زائد من الكريات صغيرة الحجم أو الكريات الحمراء الكبروية. مثل هذه القياسات قد تدل على وجود زيادة صغيرة لكن مهمة في النسبة المئوية سواء للكريات صغيرة الحجم أو كريات الحمراء الكبروية قبل أن يكون هناك أي تغيير في حجم الكريات الوسطى.

قياس توزيع كريات الدم الحمراء مشتق تحليل ذروة النبضات ويمكن التعبير سواء كانحراف معياري (in fl) أو معامل التغيير (CV) (%) لقياسات حجم كريات الدم الحمراء. توضح معدات باكمان-كولتر وباير-تيكنيكون قياس توزيع كريات الدم الحمراء، كما أن معدات الانحراف المعياري وسيسميكس تبينه كانحراف معياري أو معامل اختلاف. النطاق المرجعي العادي في الترتيب 12.8 ± 1.2% مثل معامل الاختلاف و42.5 ± 3.5 فيمتو لتر مثل الانحراف المعياري. ومع ذلك، تم الإبلاغ عن نطاقات مختلفة بصورة كبيرة؛ ومن ثم فمن المهم للمختبرات تحديد النطاقات المرجعية الخاصة بهم. تم توضيح قياس توزيع كريات الدم الحمراء حيث تم العثور على الانحراف المعياري لبعض القيمة للتمييز بين عوز الحديد (زيادة قياس توزيع كريات الدم الحمراء عادةً) وخلة الثلاسيمية (قياس توزيع كريات الدم الحمراء عادي عادةً) وبين فقر الدم الضخم الأَرومات (قياس توزيع كريات الدم الحمراء زائد غالبًا) وأسباب كبر الكريات (قياس توزيع كريات الدم الحمراء أكثر من كونه عاديًا في الغالب).

4.2.8 العدد الإجمالي لكريات الدم البيضاء 

يحدد إجمالي كريات الدم البيضاء في الدم بالكامل حيث انحلت كريات الدم الحمراء. يتطلب وجود عامل حالّ لتدمير كريات الدم الحمراء وتقليل سدوية كريات الدم الحمراء إلى بقايا لا تسبب أي استجابة تذكر في نظام العد دون التأثير على الكريات البيضاء بطريقة يتم فيها تغيير قدرة النظام على عد تلك الخلايا. توصي العديد من جهات التصنيع بعوامل كشف معينة، وبالنسبة للمعدات متعددة القنوات التي تقوم بعد تفريقي مؤتمت، يعد استخدام الكاشف الموصى به أمرًا أساسيًا.

تقوم المعدات متعددة القنوات المؤتمتة بالكامل بإجراء عد كريات الدم البيضاء من خلال المعاوقة أو تقنية تشتيت الضوء أو كلاهما. يتم عد الجزئيات المتبقية في عينة الدم المخففة بعد انحلال كريات الدم البيضاء أو، في حالة وجود بعض معدات تشتيت الضوء، بعد جعل كريات الدم الحمراء شفافة. يتم تعيين الحدود لاستثناء الصفيحات العادية من العد، على الرغم من تضمين الصفيحات الكبيرة. يتم تضمين بعض أو كل كريات الدم الحمراء المنواة الحالية، حيث أنه عند وجود تلك الخلايا يقترب العد إلى إجمالي عدد الكريات المنواة أكثر من كريات الدم البيضاء.

يحدث انخفاض كريات الدم البيضاء أحيانًا اصطناعيًا نتيجة لتراص الكريات البيضاء أو تخزين العينة الممتدة أو الخلايا الهشة (على سبيل المثال في ابيضاض الدم). العد العالي الاصطناعي أكثر شيوعًا وينتج عادة من فشل انحلال كريات الدم الحمراء. وباستخدام معدات معينة، فقد يحدث هذا مع خلايا المواليد الجدد أو ما يترتب على ظهور الدم في البول أو في وجود الهيموغلوبين غير الطبيعي مثل الهيموغلوبين S أو الهيموغلوبين C؛ قد يكون العد المرتفع أيضًا نتيجة التخثرات الصغيرة أو تلازن الصفيحات أو وجود كريوغلوبولين.

4.2.9 العد التفريقي المؤتمت

تستخدم معظم العدادات التفريقية المؤتمتة المتوافرة الآن عد الكريات المتدفقة المضمن في عداد دم كامل بخلاف العدادات التفريقية القائمة بذاتها. وبصورة متزايدة، تمتلك عدادات كريات الدم المؤتمتة سعة عد تفريقية توفر عدًُا تفريقيًا بثلاثة أجزاء أو من خمسة إلى سبعة أجزاء. يتم إجراء العد على دم مخفف بالكامل حيث تكون الكريات الحمراء تحللت أو تم جعلها شفافة. يعين العد التفريقي ثلاثي الأجزاء الكريات إلى الفئات المخصصة عادةً:

(أ) "أَشكال مأطورة" أو "كريات كبيرة"؛

(ب) "اللمفاويات" أو "الكريات الصغيرة"؛ و

(ج) "الوحيدات" أو "الكريات وحيدة النواة" أو "الكريات الوسطى".

من الناحية النظرية، تشتمل فئة المحببة على كَثرة اليوزينيات والقعدات، لكن من الناحية العملية هي شائعة لنسبة ملموسة من الخلايا من هذه الأنواع المراد استثنائها من فئة المحببة وعدها بدلاً من فئة الوحيدات.

تصنف العدات التفريقية من خمسة إلى سبعة أجزاء الخلايا كعدلات ويوزينيات وقعدات ولمفاويات ووحيدات، وفي عد تفريقي ممتد قد يشتمل أيضًا على خلايا غير ناضجة كبيرة (مكونة من أروميات ومحببات غير ناضجة) واللمفاويات اللانموذجية (بما في ذلك الأروميات الصغيرة).

 المعدات المؤتمتة التي تقوم بعد تفريقي ثلاثي الأجزاء أو من خمسة إلى سبعة أجزاء قادرة على "تمييز" العد أو رفضه من أغلبية العينات ذات كريات دم حمراء منواة والنقويات وسليفة النقوية والأروميات والليمفاويات اللانموذجية. وبدرجة أقل، فإن المعدات التي تدمج العد التفريقي ثلاثي الأجزاء، على الرغم من عدم قدرتها على عد  اليوزينيات أو القعدات، قادرة على تمييز نسبة كبيرة من العينات التي لديها عدد زائد من هذا النوع من الخلايا.

 العدادات التفريقية المؤتمتة تستخدم تدفق عد الكريات لتصنيف كريات أكثر بكثير مما هو ممكن مع العد التفريقي اليدوي. وبالتالي يكون العد المؤتمت أكثر دقة من العد اليدوي؛ ومع ذلك، ومع فئات خلايا معينة، لاسيما الوحيدات والقعدات، تكون درجة الدقة أقل أحيانًا من المتوقع لعدد الخلايا الذي تم عده، مما يشير إلى أن هذه الخلايا غير مصنفة بطريقة متسقة. دقة العدادات المؤتمته أقل تأثيرًا من دقتها. ومع جميع أنواع العدادات، يمكن أن تؤدي سمات الخلايا غير العادية أو تقادم عينة الدم إلى سوء تصنيف الخلايا. وعلى الرغم من أن أغلبية العينات تحتوي على خلايا غير طبيعية "مميزة"، فالأمر ليس كذلك دائمًا؛ مع وجود كريات الدم المنواة والمححبات غير الناضجة والليمفاويات اللانموذجية والأروميات (حتى أرقام الأروميات الكبيرة أحيانًا) قد لا تسبب وجود "تمييز". ومع ذلك، يفوت أيضًا المراقبون البشريون القائمون على العد التفريقي اليدوي لـ 100 خلية الشذوذات الهامة. وبصورة عامة، فقد تم مقارنة العد المؤتمت بصورة تفضيلية مع العد اليدوي الروتيني، لاسيما إذا كانت الأداة مخصصة لوظيفتين فقط، مما يؤدي إلى إجراء عد تفريقي على عينات عادية وعينات غير عادية "مميزة". يتم تمييز الشذوذات المورفولوجية، وينبغي دائمًا إجراء الفحص المجهري لشريط عينة دم مبقعة.

  في ظل وجود عدد كبير من كريات حمراء منواة، فإن العدد الكلي هو ليس "كريات دم بيضاء" حقيقية ولا "إجمالي عدد كريات منواة" حقيقي، وسيكون عد كريات الدم البيضاء المحسوبة من الإجمالي بالضرورة خاطئًا إلى حد ما.

وتشتمل المعدات قيد الاستخدام حاليًا والتي تعد الكريات الحمراء المنواة وتصحح تداخل كريات الدم البيضاء مع الكريات الحمراء المنواة، على Abbott CellDyn 4000 وSysmex XE2100 وBeckman-Coulter LH750.

تعتمد العدادات التفريقية على التعرف على الأنماط في شرائط الدم المبقع والتي يفضلها مبدئيًا اختصاصيي علم الدم، إلا أنها بطيئة نسبيًا، ونظرًا لأنها تقوم بعد عدد صغير من الخلايا في وقت معقول، فإن دقة العد المؤتمت لم يكون أفضل من العد العادي. ومع ذلك، بفضل تقنية الحوسبة المحسنة واستخدام الشبكات العصبية الصناعية، فإن هذه المعدات (مثل DiffMaster وCellVision AB وSE-223 70 وLund وSweden) قادرةً الآن على توفير عد تفريقي مفيد لعينات الدم المشتملة على خلايا غير طبيعية. يمكن معالجة ما يصل إلى 30 شريط في الساعة ومراجعتهم، كما يمكن إعادة تصنيف الخلايا غير الطبيعية متى تطلبت الحاجة.

4.2.10 معلمات كريات الدم البيضاء الجديدة

العديد من المعدات قادرة على "تمييز" وجود ليمفاويات لانموذجية أو "مختلفة" أو سمات مثل التغيير في الحجم والمعاوقة أو خصائص تشتيت الضوء. تستطيع العدادات المؤتمتة لكريات الدم البيضاء أيضًا تحليل خصائص الخلية بواسطة التقنيات الجديدة وتحديد نوع الخلايا عبر السمات التي تختلف بدرجة كبيرة من تلك المستخدمة عند فحص شريط الدم بصريًا. من الممكن، على سبيل المثال، تحديد اليوزينيات من خلال قدرة حبيباتها على استقطاب الضوء أو استكشاف الزيحان إلى اليسار أو وجود أروميات من خلال تشتيت الضوء المنخفض لنواة الكثير من المحببات غير الناضجة. وهناك أيضًا احتمالية تقديم معلومات ليست مشابهة مباشرةً مع تلك المتوافرة من العد التفريقي اليدوي. المعدات التي تضمن رد الفعل الكيميائي الخلوي تعطي معلومات حول نشاط الإنزيم الموضحة كمؤشر نشاط بيروكسيداز متوسط (MPXI)؛ النطاق القياسي يتراوح من -10 إلى +10. تمت ملاحظة مؤشر نشاط بيروكسيداز متوسط زائد في العدوى، وفي بعض حالات خلل التنسج النخاعي وابيضاض الدم، في متلازمة العوز المناعي المكتسب وفقر الدم الضخم الأرومات في حيث أن مؤشر نشاط البيروكسيداز المتوسط المنخفض يحدث في عوز البروكسيديز للعدلات المكتسب. وقد تم اقتراح أن المعلمات المستخدمة لتحديد أنواع كريات الدم البيضاء قد تسمح أيضًا باكتشاف بوجود صباغ ملاري عند إجراء اختبار فحص في المناطق التي تنتشر فيها الملاريا.

4.2.11 عد الصفيحات

يمكن عد الصفيحات في الدم بالكامل باستخدام نفس أساليب الكشف الكهربائية والكهروضوئية كما هي مستخدمة لعد كريات الدم الحمراء. يلزم وجود حد أعلى لفصل الصفيحات عن كريات الدم الحمراء، وحد أدنى لفصل الصفيحات عن الحطان والتشويش الإلكتروني. يجب منع إعادة تدوير كرات الدم الحمراء بالقرب من الفتحة، حيث قد تؤدي النبضات إلى تحفيز تلك النبضات الصادرة عن الصفيحات. هناك ثلاثة أساليب مستخدمة لإعداد الحدود:

(أ) يمكن عد الصفيحات بين حدين ثابتين (على سبيل المثال بين 2 و20 فمتولتر؛

(ب) يمكن عد النبضات بين الحدود الثابتة مع إحكام لاحق لمنحنى والاستقراء بحيث يتم تضمين الصفيحات الواقعة خارج الحدود الثابتة في العد المحوسب.

(ج) يمكن أن تختلف الحدود تلقائيًا، وفقًا لخصائص عينات الدم الفردية، لإجراء حساب الكريات الصغيرة أو كريات الدم مشدوفة أو للصحيفات الكبيرة.

وقد وضعت طريقة جديدة لعد الصفيحات من خلال عد الكريات في التدفق وقد تم تمييز الصفيحات في عينة دم فلورسينيًا مع جسم مشاد أحادي النسيلة أو مجموعة من المضادات وبقياس كريات الدم الحمراء: يمكن حساب نسبة الصفيحات وعدها. الأجسام المضادة الملائمة لمستضدات الصفيحات هي CD41 وCD42 وCD61. تستخدم هذه الطريقة CD41 وCD61 والتي تم اعتمادها من المجلس الدولي للتوحيد القياسي في أمراض الدم حيث أن في الطريقة المرجعية توفر بعض المعدات الآن عد صحيفات مناعية مؤتمت للاستخدام التشخيصي. وعلى الرغم من قدرة هذه المعدات على عد الصفيحات لمستويات 10 × 109/l أو أقل، وتجدر الإشارة أن الدقة في هذه المستويات دائمًا ضعيفة مع معاملات الاختلاف بنسبة من 22 إلى 66% وهي قيد الملاحظة والعد المتوسط المختلف بشكل ملحوظ بين المعدات.

قد يكون عد الصفيحاتالاصطناعي المنخفض المؤتمت نتيجة الصفيحات الكبيرة التي تم التعرف عليها كريات دم حمراء وتجمع صحيفات ناجم عن الإيديتات وتستل. قد يكون عد الصفيحات الخطأ المرتفع نتيجة وجود كريات صغيرة جدًا أو كريات دم مشدوفة بصورة ملحوظة، إلى شدفات الخلايا في ابيضاض الدم، أو إلى بكتريا أو فطر.

4.2.12 حجم الصفيحات الوسطى

يمكن تطبيق نفس الأساليب المستخدمة مع الكريات الحمراء المحجمة على الصفيحات. يعتمد حجم الصفيحات الوسطى بصورة كبيرة على أسلوب القياس والطول وظروف التخزين قبل اختبار عينة الدم. عند قياس حجم الصفيحات الوسطى بواسطة تقنية المعاوقة، وجد أن النتيجة تختلف عكسيًا مع عد الصفيحات في الحالات العادية. في حال استقراء هذا المنحنى، فسنجد أن البيانات تلاءم المنحنى عند حدوث قلة صفيحات من خلال تدمير الصفيحات المحيطية، ومع ذلك فإن حجم الصفيحات الوسطى أقل من المتوقع عند حدوث قلة الصفيحات بواسطة فقر الدم الضخم الأرومات أو فشل نقي العظم. ويعد حجم الصفيحات الوسطى بصورة عامة أكبر من المتوقع في الاضطرابات التكاثرية النقوية، لكن لم يكن تمييز كثرة الصفيحات الأساسية المجهولة من كثرة الصفيحات النشطة على الأساس أمر ناجحًا بصورة كبيرة.

تتضمن معلمات الصفيحات الأخرى التي يمكن حسابها باستخدام عدادات آلية، قياس توزيع الصفيحات (PDW) الذي يمثل مقياسًا لتفاوت كريات الصفيحات، و"نسبة الصفيحات" التي تمثل ناتج حجم الصفيحات الوسطى (MPV) وعدد الصفيحات، وعن طريق قياسها باستخدام مكداس الدم، قد يبدو أنها عبارة عن مؤشر لمتوسط الصفيحات المنتشرة في وحدة حجم الدم. تم اكتشاف فاعلية استخدام معين لقياس توزيع الصفيحات (PDW) تتلخص في التمييز بين كثرة الصفيحات مجهولة السبب (زيادة في قياس توزيع الصفيحات (PDW)) وتفاعل الصفيحات مجهولة السبب (قياس توزيع الصفيحات (PDW) سوي). لا يبدو أن نسبة الصفيحات تقدم أي معلومات عن القيمة السريرية.

4.2.13 عد الخلايا الشبكية

تم تطوير عدادات الخلايا الشبكية الآلية باستخدام الحقيقة التي تنطوي على جمع مختلف الصبغات والملونات التألقية مع الحمض النووي الريبي (RNA) للخلايا الشبكية. الرابط التالي للصبغة، من الممكن عد الخلايا المتألقة باستخدام عداد الكريات المتدفقة. تندمج معظم عدادت الدم الآلية بالكامل مع سعة تعداد الخلايا الشبكية حاليًا حيث أنه لم يعد من الضروري استخدام عداد خلايا شبكية قائم بذاته، كذلك لم يعد مناسبًا استخدام عداد كريات متدفقة للأغراض العامة. قام ICSH (اﻟﻤﺠﻟس اﻟدوﻟﻲ ﻟﻟﺘوﺤﻴد اﻟﻘﻴﺎﺴﻲ ﻓﻲ ﻤﺠﺎل ﻋﻟم اﻟدم) بنشر معيار دولي لهذه الطريقة. تشمل الصبغات المستخدمة في النظم المختلفة أورامين O (سيسميكس) وثيازول أورانج (ABX) وCD4K 530 (آبوت) بالإضافة إلى الصبغات غير المتألقة مثل أوكسازين 750 (باير-تكنيكون) وزرقة الميثيلين الجديدة التقليدية (Beckman-Coulter، آبوت).

بعد الصبغ، من الضروري فصل الخلايا الشبكية عن الكريات الحمراء غير المتلونة، وحيث أن الصبغات تندمج كذلك مع الحمض الريبي النووي المنزوع الأوكسجين (DNA) للكريات المنوَّاة، فإنه يتعين أيضًا استبعاد تلك الكريات.

ويتم تحديد عتبة ذلك الاستبعاد عن طريق كثافة التألق وتحديد أبعاد الجسيمات. وبالرغم من عدم وضوح مسألة فصل الخلايا الشبكية عن الكريات الحمراء الناضجة في جميع الأحوال، فإن عدادات الخلايا الشبكية الآلية ترتبط جيدًا مع عدادات الخلايا الشبكية اليدوية، ومع ذلك قد تختلف العدادات المطلقة لأن العدادات الآلية تعتمد على ظروف الحضانة وطريقة معايرة الأدوات. وتعد الدقة أفضل كثيرًا عن العداد اليدوي لأنه يتم عد كريات أكبر بكثير بالإضافة إلى التخلص من العنصر الذاتي الملازم لعملية تمييز الخلايا الشبكية المتأخرة. تتلخص المصادر المحتملة لعدم الدقة في تضمين بعض الكريات البيضاء والصفيحات، وبصورة أقل، أجسام هول- جولي أو طفيليات الملاريا في عملية عد "الخلايا الشبكية".

تستقر عدادات الخلايا الشبكية الآلية إلى حد ما في الدم المخزن لمدة تتراوح من يوم إلى يومين في درجة حرارة الغرفة العادية أو من ثلاثة إلى خمسة أيام في درجة حرارة 4 مئوية.

4.2.14 تجزئة الخلايا الشبكية غير الناضجة

تقدم الأدوات الآلية بالكامل مقياسًا لدرجات مختلفة من نضج الخلية الشبكية وذلك لأن معظم الخلايا الشبكية غير الناضجة، والتي انتجت عند ارتفاع مستويات الإريثروبويتين، تحتوي على العديد من الحمض النووي الريبي (RNA) والتألق بصور أقوى بكثير من الخلايا الشبكية الناضجة التي تظهر بشكل طبيعي في الدم المحيطي. كما أن المعلمات التي تشير إلى عدم نضج الخلية الشبكية لديها أهميتها السريرية المحتملة. على سبيل المثال، تم ملاحظة زيادة في كثافة التألق الوسطية الدالة على وجود خلايا شبكية غير ناضجة وهي بمثابة علامة مبكرة على حدوث تهجين بعد عملية زراعة النخاع العظمي.

خصائص نتاج الخلايا الشبكية في أنواع مختلفة من نتاج فقر الدم يمكن تقديرها على نحو خاص من خلال رسم بياني خارجي له متغيرين يربط بين كثافة التألق وعدد الخلايا الشبكية. وكما هو موضح سابقًا،

يدل العد الإجمالي المنخفض مع تجزئة الخلايا الشبكية غير الناضجة (IRF) نسبيًا على إعادة إسكان النخاع مرة أخرى،

وحيث أن قلة الشبكيات مع انخفاض تجزئة الخلايا الشبكية غير الناضجة (IRF) مثل حالات فقر الدم اللاتنسجي الوخيم أو الفشل الكلوي

حدوث عد إجمالي مرتفع مع ارتفاع تجزئة الخلايا الشبكية غير الناضجة (IRF) في حالات حل الدم الوخيم وفقدان الدم،

وفي حين حدوث عد إجمالي منخفض إلى معتدل مع ارتفاع تجزئة الخلايا الشبكية غير الناضجة (IRF) في حالات شذوذ تكون الكريات الحمر وفي حالة الاستجابة المبكرة إلى مقويات الدم.  كذلك فإن ظهور الخلايا الشبكية مع ارتفاع التألق يبشر بالاستجابة عند معالجة فقر الدم اللاتنسجي الوخيم باستخدام معالجة كابتة للمناعة

4.2.15 معايرة عدادات كريات الدم الآلية

يوصى بالطرق التالية لمعايرة أحد عدادات كريات الدم الآلية

         1.      عن طريق استخدام عينات الدم الطبيعية الحديثة التي تم تعيين القيم إليها لكل من التهاب الكبد (Hb) وحجم الكريات المكدسة (PCV) وكريات الدم الحمراء (RBC) وكريات الدم البيضاء (WBC) وعدد الصفيحات باستخدام طرق مرجعية موحدة

         2.      عن طريق استخدام معاير مستقر (سواء عينة دم محفوظة أو بديلة) حيث تم تعيين قيم مناسبة للأداة الموجودة في هذه المسألة عن طريق المقارنة بعينة دم طبيعية حديثة

         3.      عن طريق استخدام معاير تجاري مع قيم معينة مناسبة للأدوات الموجودة في هذه المسألة

 

لأسباب اقتصادية وملائمة، تستخدم مواد التحكم عادة كجهاز معايرة؛ ولكن لا ينصح بهذه الممارسة. حيث أن تلك المواد ليست مستقرة بالشكل الكافي لتقوم بوظيفة المعايرات، كما أن قيمها المعلنة غالبًا ما تكون تقريبية الأمر الذي لا يمكن تعيينه من قبل أي طريقة مرجعية. فقد تم تصميمها لوضع نتائج الاختبارات داخل نطاق معلن على مدار فترة زمنية معلنة بدلاً من النتائج المحددة.

فيما يلي إجراء تعيين القيم لعينات الدم الحديثة بالإضافة إلى تعيينها بطريقة غير مباشرة إلى معاير مستقر:

         1.      تم الحصول على عينات دم مقدار 4 مل من ثلاثة متطوعين لا يعانون من أي أمراض تتعلق بالدم ومنع تخثرها باستخدام K2 EDTA.

         2.      تم تعيين قيمة التهاب الكبد (Hb) باستخدام طريقة سيانيد الهيموجلوبين ومتوسط القياسين.

         3.      تم تعيين حجم الكريات المكدسة (PCV) باستخدام طريقة المكداس المكروي، عن طريق أخذ متوسط القياسات في أربعة أنابيب من المكداس المكروي.

         4.      يتم تحديد عدد كريات الدم الحمراء (RBC) عن طريق القيام بالعد على عداد معاوقة ذو فتحة أحادية القناة، قادر على عد الكريات بصورة مباشرة؛ مما يعني استخدام متوسط عينتين مخففتين، بعد عد كل منهما مرتين.

         5.      تم تعيين حجم الكرية الوسطى (MCV) عن طريق الحساب من كريات الدم الحمراء (RBC) وحجم الكريات المكدسة (PCV).

         6.      يتم تحديد عدد كريات الدم البيضاء (WBC) عن طريق القيام بالعد على جهاز معاوقة ذو فتحة أحادية القناة، قادر عد الكريات بصورة مباشرة؛ مما يعني استخدام متوسط عينتين مخففتين، بعد عد كل منهما مرتين.

 

 

حجم الكريات المكدسة ومتوسط حجم الكرية

تقدر عدادات خلايا الدم المؤتمتة الحديثة حجم الكريات المكدسة من خلال تقنية ذات تواصل صغير مع تكديس كريات الدم الحمراء عن طريق النبذ. وأحيانًا يكون من المريح استخدام مصطلحات مختلفة للتمييز بين الاختبارات اليدوية والمؤتمتة، ولهذا السبب، اقترح المجلس الدولي للتوحيد القياسي في أمراض الدم مصطلح "الهيماتوكريت" (مكداس الدم) بدلاً من حجم الكريات المكدسة، والذي ينبغي استخدامه للقياسات المؤتمتة. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه في الماضي، كانت مصطلحات "حجم الخلايا المكدسة" و"مكداس الدم" تستخدم بشكل تبادلي للإجراء اليدوي.

وتشمل مصادر الخطأ توزيع الخلايا غير المتساوي في العينة؛ الكثير أو القليل من الخلايا في العينة؛ والتقديرات الذاتية ما إذا كان هناك خلية معينة تقع داخل منطقة العد المحددة؛ وتلوث مكداس الدم؛ والاختلاف في تحميل العينة؛ والاختلافات في أسلوب المستخدم.

باستخدام المعدات المؤتمته، يكون اشتقاق عدد كريات الدم الحمراء وحجم الكريات المكدسة وحجم الكريات الوسطى مترابطًا بصورة وثيقة. يؤدي مرور خلية ما عبر فتحة عداد معاوقة أو خلال نبضات ضوئية صادرة من معدة تشتيت الضوء إلى توليد نبضة كهربائية للذروة تتناسب مع حجم الخلية. يتيح عدد النبضات الصادرة بتحديد عدد كريات الدم الحمراء، كما تم مناقشتها لاحقًا. يتيح تحليل ذروة النبضة تحديد حجم الكريات الوسطى وحجم الكريات المكدسة. يتم حساب متوسط ذروة النبضة، ويشير هذا إلى أن حجم الكريات الوسطى وحجم الكريات المكدسة يمكن استنتاجه من خلال ضرب حجم الكريات الوسطى المقدر في عد كريات الدم الحمراء. وبالمثل، في حال جمع ذروات النبضات، يشير ذلك الشكل إلى حجم الكريات المكدسة، وبالمقابل، يمكن استنتاج حجم الكريات الوسطى بقسمة حجم الكريات المكدسة على عد كريات الدم الحمراء.

تتطلب المعدات المؤتمته إجراء معايرة قبل تحديد حجم الكريات المكدسة وحجم الكريات الوسطى. يمكن أن يعتمد حجم الكريات المكدسة على تعيينات حجم الكريات المكدسة اليدوية. وبدلاً من ذلك، يمكن معايرة حجم الكريات الوسطى من خلال ذرى النبضات الناشئة عن خرزات اللاتكس أو الخلايا المستقرة أو بعض الجزئيات الأخرى ذات حجم معروف؛ ومع ذلك، لن تُظهر بالضرورة كريات الدم الحمراء البشرية غير المستقرة مقعرة الوجهين والمرنة، نفس الخصائص في عداد خلية ما كجزيئات اللاتكس أو بعض المعايرات الاصطناعية الأخرى. تقيس أنظمة معاوقة الفتحة حجمًا ظاهريًا أكبر من الحجم الفعلي، والذي يتأثر بواسطة "عامل الشكل"؛ وهذا العامل أقل من 1.1 للصغار وكريات الدم الحمراء المرنة؛ بين 1.1 و1.2 للخلايا مقعرة الوجهين المستقرة وما يقرب من 1.5 للكريات، سواء كانت خلايا ثابتة أو كريات اللاتكس.

يختلف حجم الكريات الوسطى، وبناء عليه، وحجم الكريات المكدسة كما هو محدد بواسطة عداد مؤتمت مع سمات معينة للخلية خلاف الحجم. وكما تم الإشارة سابقًا، مثل هذه السمات تشمل الشكل والذي يتحدد بدوره جزئيًا بسبب المرونة. مع عدادات المعاوقة، تصبح كريات الدم الحمراء قرصية الشكل ممدودة على شكل سيجار حيث تمر الخلايا عبر الفتحة؛ ويحدث ذلك لوجود تشوه في الاستجابة لقوة القص، والتي تحدث في الخلايا ذات المرونة العادية. الخلايا ذات تركيز هيموغلوبين منخفض تخضع لمزيد من التمدد عن الخلايا العادية؛ ويؤدي ذلك إلى "عامل شكل" منخفض وذروة نبضات منخفضة فيما يتعلق بالحجم الحقيقي للخلية والتقليل من حجم الكريات الوسطى. وبالعكس، الخلايا ذات أغشية قوية غير عادية والخلايا مثل الكريات الحمراء الكروية ذات مستوى هيموغلوبين مرتفع ستخضع لمستوى تشوه أقل من العادي وسيتم المبالغة في تقدير حجم الكريات الوسطى. كانت معدات تشتيت الضوء السابقة تبالغ في تقدير حجم كريات الدم الحمراء ذات مستوى هيموغلوبين منخفض حيث يتأثر تشتيت الضوء بتركيز الهيموغلوبين. وترى هذه الخادعات مع كريات الدم الحمراء العادية ذات تركيزات هيموغلوبين متباينة، إلا أنها تبدو أكثر وضوحًا مع كريات الدم الحمراء للمرضى الذين لديهم تشوهات في تخليق الهيموغلوبين مثل هؤلاء المرضى الذين يعانون من عوز الحديد. تم تطوير معدات تشتيت الضوء لتجنب الخادعات من هذا النوع. تتسم الخلايا بحجمها الدائري بحيث تتوافق سمات تشتيت الضوء مع ضرورة اتباع قوانين الفيزياء.

حجم الكريات الوسطى وحجم الكريات المكدسة المؤتمتة عُرضة للعديد من الأخطاء التي لا تحدث أو أقل من كونها مشكلة بالطرق اليدوية. ويشمل هذا، الناتج من التخثرات الصغيرة أو التخثر الجزئي للعينة، وكريات الدم الصغيرة للغاية بجانب وجود غلوبولين بردي أو تراص بارد؛ والأخير هو السبب الأكثر شيوعًا للزيادة الصناعية لحجم الكريات الوسطى نظرًا لأن حجم تكتلات الخلايا يبدو كما لو كان خلايا فردية. ونظرًا لانخفاض تقييم عد كريات الدم الحمراء، يتأثر حجم الكريات المكدسة بصورة أقل، على الرغم من أنه غير دقيق. ومن النادر للتراص الدافئ أن يسبب مشكلة مشابهة. قد يتسبب التمنجل في زيادة اصطناعية في حجم الكريات الوسطى وحجم الكريات المكدسة، حيث أن التغييرات في أسمولية البلازما الحادث، على سبيل المثال، في حالات فرط سكر الدم يسبب أيضًا زيادة اصطناعية لحجم الكريات الوسطى وحجم الكريات المكدسة.

 

4.2.16 وضع علامة على عدادات الدم الآلية

تشير "العلامات" إلى العلامة الدالة على أن العينات الخاضعة للتحليل قد يحدث لها تشوه خطير لأن واحد أو أكثر من متغيرات عدادات الدم يقع خارج إطار الحدود المعينة له (عادة 2SD (الانحراف المعياري)) أو أن هناك تشوه نوعي يتطلب القيام بفحص لمراقبة الجودة و/أو إجراء فحوصات إضافية. ويتضمن ذلك عادة استعراض فلم الدم. على الرغم من أنه من المرغوب فيه من الناحية النظرية لكل عد دموي أن يتضمن فحص للفلم الملون، فإن يواجه صعوبات تتمثل في تزايد أعباء العمل مما يستلزم ترشيد فعال من حيث الوقت والتكلفة فضلاً عن استخدام محللات آلية تقوم بالإبلاغ عن العدد المتباين للكريات البيضاء المتعلقة بكل عينة. ونتيجة لذلك، يجري فحص عدد أقل من أفلام الدم مجهريًا. وهكذا، فإن القرار المتعلق بموعد إجراء فلم الدم أو صبغه أو فحصه ينبغي أن يأخذ في عين الاعتبار العلامات والحاجة إلى ضمان المعولية التحليلية. ويتضمن ذلك إجراء فحص لأي تغييرات خطيرة تحدث بعد آخر عملية عد (فحص دلتا) فضلاً عن أي ظروف سريرية معينة. فيما يلي دليل لهذا التحديد.

                   طلب عد دموي: هل هذه هي المرة الأولى للعد أم أنها إعادة للعد؟

                   العد للمرة الأولى: هل هذا اختبار فحص روتيني أم أنه لفئة خاصة؟

إذا كان روتينيًا: تقرير محلل لعد الدم فقط

الفلم المطلوب إذا تمت الإشارة إلى أي علامات

إذا كان لفئة خاصة: الفلم المطلوب:

         1.      المرضى الذين تم تشخيصهم بإصابتهم بأمراض الدم

         2.      المرضى الذين يتلقون العلاج الإشعاعي و/أو العلاج الكيميائي

         3.      أمراض الكلى

         4.      حديثو الولادة

         5.      وحدة العناية المركزة

         6.      إذا كان قد طلب إجراء اختبارات خاصة أيضًا لحالات: كثرة الوحيدات العدوائية أو فقر الدم الانحلالي أو الاعتلال الإنزيمي أو الهيموغلوبينات الشاذة

         7.      إذا كانت التفاصيل السريرية في نموذج طلب تشير إلى تضخم العقد اللمفية أو الطحال أو اليرقان أو توحي بإمكانية وجود ابيضاض الدم أو ورم لمفي

         8.      طلبات محددة من قبل الطبيب السريري

 عدد مرات التكرار: الفلم المطلوب:

         1.      اختيار دلتا الإيجابي بالمقارنة مع السجل السابق

         2.      أي علامة تحدث في هذا العدد

         3.      في كل مناسبة للمرضى الذين يعانون من أمراض الدم المعروفة لحالات حديثي الولادة وعندما يطلب الأطباء السريريون على وجه التحديد