صبغ اللطاخات

صبغ اللطاخات

صبغة جرام

تصنف الكائنات الحية وفقًا لتفاعلها مع صبغة جرام. تحتوي البكتيريا موجبة الجرام على طبقات ببتيدوغليكان أكثر سمكًا وأكثر كثافة في جدران خلياها. يخترق اليود جدران الخلية في هذه البكتيريا ويغير الصبغة الزرقاء ليمنع انتشارها من خلال جدران الخلية في أثناء عملية إزالة اللون. يجب توافر بكتيريا موجبة الجرام جدران خليتها سليمة لإنتاج تفاعل موجب. يتم صبغ الخلايا سلبية الجرام التي لا تحتفظ بالبنفسج الميثيل/البلوري بلون متباين 26. وقد يستخدم الأحمر المحايد أو صبغة الصفرانين أو الكربول فوكسين كلون متباين.

طريقة جرام لفحص اللطخات

1.     تُحضر اللطخة وتسخن بلطف حتى تثبت.

2.     تغمر الشريحة بالبنفسج الميثيل/البلوري 0.5% وتترك لمدة 30 ثانية.

3.     ُتُميل الشريحة ويوضع عليها محلول اليود لوكول (1%) بقدر كافٍ لغسل الصبغة وتغطى بمحلول جديد من اليود وتترك للتفاعل لمدة 30 ثانية.

4.     تُميل الشريحة وتغسل من اليود باستخدام إيثانول أو أسيتون ذات تركيز 95 - 100% حتى ينتهي اللون لتجف اللطخة.

5.     تشطف بالمياه.

6.     يوضع عليها ملون مباين 0.1% (أحمر محايد أو صبغة الصفرانين أو الكربول فوكسين) وتترك للتفاعل لمدة دقيقتين تقريبًا.

7.     تغسل بالمياه وتجف اللطخة.

التفسير

النتيجة الإيجابية:     

تلون الكائنات الحية موجبة الجرام بلون أرجواني / أزرق غامق.

النتيجة السلبية

تلون الكائنات الحية سلبية الجرام بلون قرنفلي / أحمر.

مراقبة جودة الكائنات الحية

قد يستخدم المستنبت المغذي الذي يحتوي على كائنات حية موجبة الجرام وسلبية الجرام لمراقبة الجودة.

صبغة تسيل-نلسن (لعصيات صامدة للحمض)

يستخدم هذا الأسلوب في الصبغ لتوضيح وجود عصيات صامدة للحمض والكحول (AAFB) تحتوي على أغلفة شمعية تجعل من الصعب إجراء عملية الصبغ أو إزالة اللون. ويعد الصبغ باستخدام صبغة اورامين رومدامين أكثر حساسية من صبغة تسيل-نلسن وبالتالي تكون مناسبة أكثر لتقييم اللطخات من العينات السريرية. يوفر التلون باستخدام صبغة تسيل-نيلسن تفاصيل مورفولوجية ويعد أكثر فائدة لتأكيد وجود AAFB في المستنبتات المغذية الإيجابية.

الطريقة

1.     تغمر الشريحة بمحلول كربول فوكسين قوي.

2.     تسخن الشريحة بلطف، وبمجرد "انبعاث بخار منها" تترك لمدة تتراوح من 3 إلى 5 دقائق.

3.     تشطف بالمياه.

4.     يزال اللون لمدة تتراوح من دقيقتين إلى ثلاث دقائق باستخدام محلول حمض وكحول (3% الحجم بالحجم)، وتشطف بالمياه، وبعدئذٍ يستبدل بمحلول حمض وكحول جديد لمدة تتراوح من ثلاث إلى أربع دقائق حتى يظل لون الشريحة قرنفلي خافت.

5.     تشطف بالمياه.

6.     تلون بلون مباين باستخدام أزرق المثيلين أو أخضر الملاكيت (1% الوزن بالنسبة للحجم) لمدة 30 ثانية.

7.     تشطف بالمياه وتترك حتى تجف.

8.     تغمر بالزيت وتقرأ باستخدام مجهر ضوئي نافذ.

ملاحظة: تتبع إجراءات جهة التصنيع إذا كانت المجموعة مستخدمة تجاريًا.

التفسير

النتيجة الإيجابية:

يختلف طول العصيات صامدة للحمض من 0.5 إلى 10 ميكرومتر وتتلون بلون أحمر. وقد يظهر بعضها سبحي.

النتيجة السلبية

تتلون جميع الكائنات الحية الأخرى والمواد الأساسية بلون أخضر إذا كان ملون أخضر الملاكيت المباين مستخدمًا أو بلون أزرق إذا كان ملون أزرق المثيلين المباين مستخدمًا.

مراقبة الجودة

عنصر التحكم الإيجابي.

أنواع المتفطرة

عنصر التحكم السلبي: قد تستخدم لطخة سلبية مثبتة كعنصر تحكم سلبي.