الاثنين، 21 نوفمبر، 2016

العدد الإجمالي لكريات الدم البيضاء

 
العدد الإجمالي لكريات الدم البيضاء
مقدمة
يعتبر العد البصري طريقة بديلة ومقبولة لطريقة العد الإلكترونية بالنسبة لكريات الدم البيضاء، في حين أنه لا يوصى بها بالنسبة للطريقة الروتينية في عد الكريات الحمراء وذلك لأن عدد الكريات الذي يمكن عده ضمن فترة زمنية معقولة في المختبر الروتيني سوف يكون قليلاً جدًا لضمان نتيجة دقيقة بالشكل الكافي.
القاعدة:
قواعد عد الكريات يدويًا واستخدام حجيرة العد الخاصة بجهاز قياس الدم للعد اليدوي للكريات البيضاء والصفيحات في مساحة سطحية معروفة.
الأهمية السريرية
بعض الأسباب الشائعة للإصابة بكثرة الكريات البيضاء:
عداوى جرثومية
الالتهاب ونخر الأنسجة
اضطرابات أيضية (على سبيل المثال: تبولن الدم، ارتعاج، حماض، نقرس)
الأورام بجميع أنواعها (على سبيل المثال: سرطانة، لمفومة، ورم ميلانيني)
انحلال الدم أو النزيف الحاد
الأدوية (على سبيل المثال: العلاج بالكورتيكوستيرويد (يمنع وجود تهامش): الليثيوم، تتراسيكلين)
ابيضاض الدم النقوي المزمن، مرض التكاثر النقيي، كثرة كريات الدم الحمراء، تليف نقيي، كثرة الصفيحات المجهولة السبب
العلاج باستخدام عوامل النمو النخاعي (على سبيل المثال: G-CSF وGM-CSF)
  كثرة الوحيدات العدوائية، الحصبة الألمانية، السعال الديكي،
التهاب الكبد العدوائي، الفيروس المضخم للخلايا، فيروس العوز المناعي البشري (HIV)، هربس بسيط أو نطاق
السل، داء المقوسات، داء البروسيلات، الزهري
أشكال ابيضاض الدم الليمفاوي المزمن
ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد
لمفومة لاهودجكينية (جسيم)
تسمم درقي.


بعض الأسباب الشائعة للإصابة بقلة الكريات البيضاء:
قلة العدلات الانتقائية
محدث بالدواء
ذئبة حمامية مجموعية
متلازمة فلتي
فرط التحسس والتأَق
فيروسي (على سبيل المثال: التهاب الكبد، النزلة الوافدة، فيروس العوز المناعي البشري (HIV))
عدوى جرثومية خاطفة (على سبيل المثال: التيفود، الدخني، السل)
العينات 
تم منع تخثر الدم الوريدي أو الشعيري أو الذي يتدفق بحرية باستخدام: حمض الخليك الرباعي ثنائي أمين الإيثيلين (EDTA). يمثل الخلط الشامل لعينات الدم قبل اختبارها أهمية بالغة للحصول على نتائج اختبارات دقيقة. وفي الواقع يتعين إجراء الاختبارات في غضون 6 ساعات من الحصول على العينات نظرًا لأن بعض نتائج الاختبارات قد تتغير بفعل فترات التخزين الطويلة. ومع ذلك، فالنتائج الموثوق بها بالصورة الكافية للأغراض السريرية يتم الحصول عليها عادة من الدم المخزن حتى 24 ساعة عند درجة 4 مئوية.
الأواني الزجاجية والمعدات
حجيرات العد
إن مسألة وضوح القواعد في حجيرة العد لا تقل أهمية عن دقة المعايرة، ولذلك يوصى بأن يكون سطح الحجيرات معالج بالمعادن وأن تحتوي الحجيرات على قواعد نويباور أو قواعد نويباور المحسنة. وتضم تلك الحجيرات تسعة مناطق مخططة مقاس 1 ملم × 1 ملم والتي، عندما تغطى بشكل صحيح باستخدام غطاء سميك من الزجاج الخاص، فإن كل واحدة منها تحتوي على واسطة تخزين مقاس 0.1 ميكرولتر من الدم المخفف. يتعين عدم استخدام السواتر الزجاجية المصممة لتثبيت التحضيرات المجهرية مع حجيرات العد. يتم عرض العينة بين الحجيرة والساترة الزجاجية باستخدام أنبوب شعري أو ممص، ويتم عرض التحضير باستخدام عدسة مجهر 10 بوصة وعينية عدسة المجهر مقاس 6 أو 10 بوصة. وباستخدام حجيرات نويباور أو حجيرت نويباور المحسنة، يمكنك عد الكريات في 4 أو 8 مستطيلات أفقية مقاس 1 ملم × 0.05 ملم (80 أو 160 مربع صغير) أو في 5 أو 10 مجموعات تتكون من 16 مربع بما في ذلك الكريات التي تلامس الحافة السفلى والحافة اليسرى من المربعات الصغيرة.
 
حجيرات العد 
        المجهر
        ممص مكروي
        أنبوب اختبار

الكواشف:
مخفف
لجعل عملية عد الكريات البيضاء أسهل، يتم خلط الدم المخفف بأكلمه مع سائل لتنحل الكريات الحمراء وصبغ نوى الكريات البيضاء بلون أسود بنفسجي عميق. يشكل المخفف 2% (20 ملي/لتر) من حمض الأسيتيك الملون بالبنفسجي الشاحب وبنفسجية الحنطيان
الإجراءات
قم بعمل تخفيف للدم بمعدل 1 في 20 عن طريق إضافة 0.1 ملي لتر من الدم المخلوط جيدًا (عدم وجود خلط كافي يشكل مصدر رئيسي للخطأ) إلى 1.9 ملي لتر من المخفف في أنبوب بلاستيكي (أو زجاجي) مقاس 75 × 10. بعد إغلاق الأنبوب بغطاء أو سدادة مناسبة بطريقة محكمة، اخلط الدم المخفف في خلاطة ميكانيكية أو باليد لمدة دقيقتين على الأقل عن طريق إمالة الأنبوب بزاوية مقدارها حوالي 120 درجة مع التدوير، مما يسمح لفقاعة الهواء بخلط التعليق. املء حجيرة عد نظيفة وجافة، مع وجود ساترتها الزجاجية في موضعها، دون تأخير. ويتم تحقيق ذلك ببساطة بمساعدة ممص باستور بلاستيكي أو امتداد من الأنابيب الزجاجية الشعرية المتينة التي سمح لها بتناول التعليق بواسطة الخاصة الشعيرية. يرجى الانتباه إلى أنه تم تعبئة حجيرة العد في إجراء واحد وأنه لا وجود لسائل يتدفق في الخندق المائي المحيط بها.
حافظ على ثبات الحجيرة فوق مقعد طويل لمدة دقيقتين على الأقل حتى تستقر الكريات، ولكن ليس أطول من ذلك بكثير، نظرًا لأن التيارات الهوائية تبدأ في تجفيف الحواف في مرحلة التحضير مما يؤثر على حركة الكريات بعد استقرارها. يجب أن يكون المقعد ثابتًا ولا يتأثر بأي اهتزازات، كما يجب أن لا تتعرض الحجيرة لأي تيارات هوائية أو إلى أشعة الشمس المباشرة أو غيرها من مصادر الحرارة. من الأهمية بمكان أن تكون الساترة من زجاج سميك خاص ومسطح تمامًا، حتى تتم رؤية حلقات الانعراج عندما يتم وضعها على حجيرة العد. ينبغي أن تكون الساترة من الحجم المناسب حتى عندما يتم وضعها بشكل صحيح على حجيرة العد تقع المناطق المخططة في وسط المستطيل لتمتلئ بتعليق الكريات.
العوامل التي تؤثر على الاختبار:
إذا وقع أي من عيوب الملء التالية، يتم إنهاء التحضير وإعادة إجراء الملء مرة اخرى باستخدام حجيرة أخرى نظيفة وجافة:
                   تجاوز السعة في الخندق المائي
                   عدم امتلاء مساحة الحجيرة بالكامل
                   وجود فقاعات هواء في أي مكان في مساحة الحجيرة
                   وجود أي حطام في مساحة الحجيرة
للحصول على معامل اختلاف بمقدار 5 %، من الضروري عد حوالي 400 كرية بصورة عملية، غير أنه من المقبول عد 100 كرية بيضاء. للتقليل من أخطاء التوزيع، عد الكريات الموجودة في المساحة المخططة بالكامل (على سيبل المثال: مساحات مقاس 9 × 0.1 ميكرولتر في حجيرات عد نويباور المحسنة).
    ينتج عن العد في حقل واحد أو اثنين فقط تباين شاسع ينخفض مع تزايد الكريات التي تم عدها. ومع ذلك، يتم تحقيق الدقة العالية فقط عند عد آلاف الكريات، والذي يمكن فقط مع عدادات الكريات الآلية.



الحساب
                                        كريات الدم البيضاء (WBC)/لتر     
وبالتالي، إذا تم عد كريات N في 0.1 ميكرولتر، إذا تكون كريات الدم البيضاء (WBC)/لتر على النحو التالي: 
(على سبيل المثال: إذا تم عد 115 كرية، فإن كريات الدم البيضاء (WBC) تساوي 115 × 200 × 106/لتر = 23 × 109/لتر)
النطاق الصحي لعدد كريات الدم البيضاء

عدد كريات الدم البيضاء       4.010.0 × 109/لتر
الوحدات
× 109/لتر
 4.3.4 عدد الصفيحات
مقدمة
تستخدم الأعداد اليدوية بشكل روتيني في مختبرات تعاني من قلة الموارد، ومع ذلك فما زالت هناك حاجة إليها في المختبرات المزودة بأحدث الأجهزة بالنسبة لعينات الدم التي تحتوي على نسبة كبيرة من الصفيحات العملاقة. ومع ذلك، فبالنسبة لجميع العينات الأخرى، تعرض عدادات الدم الآلية بالكامل أعداد الصفيحات بدقة أكبر بكثير عن تلك الأعداد التي تعرضها الطريقة اليدوية لأعداد الصفيحات.
القاعدة:
يتم إجراء عمليات العد للصفيحات اليدوية عن طريق الفحص البصري للعينات المخففة والدم المتحلل بالكامل باستخدام حجيرة عد نويباور أو حجيرة عد نويباور المحسنة لإجمالي أعداد كريات الدم البيضاء. 
الأهمية السريرية
يتم إجراء هذا الاختبار للكشف عن كثرة الصفيحات أو قلة الصفيحات التي تحدث في العديد من الأمراض.
العينات
يتم احتساب أعداد الصفيحات بشكل أفضل على عينة دم غير متخثر باستخدام حمض الخليك الرباعي ثنائي أمين الإيثيلين (EDTA) والذي تم الحصول عليه بواسطة بزل وريد نظيف. كما يمكن تنفيذها على عينات الدم التي تم الحصول عليها بواسطة وخز الجلد، بيد أن النتائج لا تكون مرضية بنفس الدرجة في عينات الدم الوريدي. أعداد الصفيحات في عينات وخز الجلد تكون أقل بكثير منها في عينات الدم الوريدي وأقل ثباتًا ؛ حيث أنه من المحتمل فقد عدد متغير من الصفيحات في موضع ثقب الجلد.
الأواني الزجاجية والمعدات
حجيرات العد
إن مسألة وضوح القواعد في حجيرة العد لا تقل أهمية عن دقة المعايرة، ولذلك يوصى بأن يكون سطح الحجيرات معالج بالمعادن وأن تحتوي الحجيرات على قواعد نويباور أو قواعد نويباور المحسنة. وتضم تلك الحجيرات تسعة مناطق مخططة مقاس 1 ملم × 1 ملم والتي، عندما تغطى بشكل صحيح باستخدام غطاء سميك من الزجاج الخاص، فإن كل واحدة منها تحتوي على واسطة تخزين مقاس 0.1 ميكرولتر من الدم المخفف. يتعين عدم استخدام السواتر الزجاجية المصممة لتثبيت التحضيرات المجهرية مع حجيرات العد. يتم عرض العينة بين الحجيرة والساترة الزجاجية باستخدام أنبوب شعري أو ممص، ويتم عرض التحضير باستخدام عدسة مجهر 10 بوصة وعينية عدسة المجهر مقاس 6 أو 10 بوصة. وباستخدام حجيرات نويباور أو حجيرت نويباور المحسنة، يمكنك عد الكريات في 4 أو 8 مستطيلات أفقية مقاس 1 ملم × 0.05 ملم (80 أو 160 مربع صغير) أو في 5 أو 10 مجموعات تتكون من 16 مربع بما في ذلك الكريات التي تلامس الحافة السفلى والحافة اليسرى من المربعات الصغيرة.
     
الشكل 11: حجيرة العد
        المجهر
        ممص مكروي
        أنبوب اختبار
الكواشف:
1% أوكسالات الأمونيوم التي تحلل الكريات الحمراء، حيث يقدم المخفف عدد أعلى وأكثر دقة بالنظر إلى استخدام السيترات المنهجية والتي تترك الكريات الحمراء سليمة.
الإجراءات
يتكون المخفف من من 1% أوكسالات أمونيوم مائية تتحلل داخلها الكريات الحمراء. ينصح بهذا الإجراء بدلاً من أن استخدام السيترات المنهجية كمخفف، والتي تترك الكريات الحمراء سليمة، ومن المرجح أنها تعطي نتائج غير صحيحة وذلك عندما يكون عدد الصفيحات منخفض.
قبل تحليل عينة الدم، افحصها جيدًا للتحقق من وجود جلطات دموية. وفي حالة وجودها، ينبغي طلب عينة حديثة نظرًا لأن الجلطات ستتسبب في انخفاض عدد الصفيحات على نحو غير حقيقي. قم بعمل تخفيف للدم المخلوط جيدًا بمعدل 1 في 20 في المخفف عن طريق إضافة 0.1 ملي لتر من الدم إلى 1.9 ملي لتر من مخفف أوكسالات الأمونيوم (10 جم/لتر). ينبغي أن لا تزيد نسبة المخفف عن 500 ملي لتر في المرة الواحدة، مع استخدام الأواني الزجاجية النظيفة والماء الطازج منزوع الآيونات أو المقطر من الزجاج بعناية. وإذا كان ذلك ممكناً، ينبغي تصفية المحلول من خلال مرشح يضم مسم مكروي (0.22 ميكرو متر) والاحتفاظ به عند درجة حرارة 4 مئوية. وللاستخدام، يتم ترشيح جزء صغير من المخزون وتوزيعه على أحجام مقاس 1.9 ملي لتر في أنابيب مقاس 75 × 12 ملم.
اخلط التعليق في خلاطة ميكانيكية لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة. املء حجيرات لعد نويباور بالتعليق باستخدام أنبوب زجاجي شعري متين أو أنبوب باستور. ضع حجيرة العد في طبق بتري رطب واتركه لمدة 20 دقيقة على الأقل لإعطاء الصفيحات وقتًا لتستقر.
افحص المستحضر باستخدام عدسة مجهر مقاس 40 بوصة وعينية عدسة مجهر مقاس 6 أو 10 بوصة. تظهر الصفيحات أسفل الإضاءة الاعتيادية كجسيمات صغيرة (ولكنها ليست دقيقة) سهلة الانكسار إلى حد كبير إذا تم عرضها مع حمل المكثف لأسفل؛ حيث أنه عادة ما يتم توزيعها بشكل جيد ونادرًا ما تتواجد جراثيم مكدسة إذا تم سحب عينة الدم بإتقان. لتجنب إدخال جسيمات قذرة إلى الحجيرة، والتي قد تشكل خطأ بالنسبة للصفيحات، يجب أن تكون جميع المعدات نظيفة تمامًا. وباستخدام المجهر الطوري، من الممكن مشاهدة الصفيحات بسهولة أكبر. تعتبر حجيرة العد الخاصة، رقيقة القاع، مقاس (1 ميكرو متر)، هي الخيار الأفضل لتأثير طوري أمثل. وينبغي عد عدد الصفيحات الموجودة في مساحة واحدة أو أكثر مقاس 1 ملم مربع. كما ينبغي أن يتجاوز العدد الإجمالي للصفيحات التي يتم عدها 200 في جميع الحالات لضمان معامل اختلاف يتراوح من 8 إلى 10%.
الحساب

وهكذا، إذا كانت قيمة N تساوي عدد الصفيحات المعدودة في مساحة تبلغ 1 ملم مربع (حجم 0.1 ميكرولتر)، فإن عدد الصفيحات لكل لتر دم يساوي:
مجال عدد الصفيحات
عدد الصفيحات         280 ± 130 × 109/لتر
العوامل التي تؤثر على الاختبار:
الأخطاء المتعلقة بالعد اليدوي للكريات عبارة عن أخطاء فنية ومتأصلة.
ومن الممكن الحد من الأخطاء الفنية عن طريق تجنب الوقوع في الأمور التالية:
                           استخدام أسلوب ضعيف في الحصول على عينة الدم
                           خلط غير كافي لعينة الدم
                           ممص غيردقيق واستخدام ممصات أو حجيرات عد تمت معايرتها بشكل سيء
                           خلط غير كاف لتعليق الكريات
                           ملء غير صحيح لحجيرات العد
                           الإهمال في عد الكريات الموجودة داخل الحجيرة

الوحدات
× 109/لتر


ليست هناك تعليقات:

إرسال تعليق