الاثنين، 21 نوفمبر، 2016

فحوصات الدم

فحوصات الدم:
فحوصات الدم التالي ذكرها يمكن القيام بها في معظم مختبرات SPANA و تتطلب قدرا قليلا من الاجهزة:
1. Haematocrit or Packed Cell Volume (PCV) :
تستخدم هذا الفحص لقياس نسبة كريات الدم الحمراء في حجم من الدم.  و يستخدم هذا لفحص فقر الدم او النشفان.
عند وضع عينة من الدم في جهاز للطرد المركزي نحصل على ثلاثة طبقات في الانبوب: في اسفل الانبوب تتجمع كريات الدم الحمراء، فوق هذه الطبقة تتجمع طبقة رفيعة جدا من كريات الدم البيضاء و فوقها طبقة من البلازما.  يجب أن تكون طبقة البلازما على درجة عالية من الشفافية.  وجود طبقة من البلازما المحمرة دليل على تكسر كريات الدم.  وجود طبقة من البلازما المصفرة دليل على اليرقان نتيجة تواجد ال bilirubin في الدم.  لاحظ أن عدم شفافية البلازما دليل على lipaemia .  (ملاحظة: عينات البلازما في الخيول و البقر تكون عادة مصفرة بشكل طبيعي).
يمكن حساب PCV عن طريق قياس ارتفاع طبقة كريات الدم الحمراء و تحويلها الى نسبة مئوية منسوبة الى الارتفاع الكلي عينة الدم في الأنبوب.
يجب دائما اجراء فحص PCV و التركيز الكلي للبروتين في البلازما بشكل متلازم.

الأجهزة و المعدات:

·   أنبوب خاص ب microhaematcrit (استخدم النوع العادي اذا اخذت عينة الدم مباشرة من سبق وضعها في مانع تجلط الدم EDTA ، أو من  قطرة  سبق اضافة الهيبارين عندما سحبت من الوريد).
·   عينة الدم في انبوب يحتوي على EDTA اذا امكن.
·   مادة مناسبة لأحكام سد الانبوب مثلا cristaseal .
·   جهاز الطرد المركزي الخاص ب microhaematocrit .
·   المقياس الخاص بقراءة microhaematocrit .
·   مناديل و كفوف خاصة الاستعمال لمرة واحدة.

الطريقة المتبعة:

1)   اقلب الانبوب المحتوي على EDTA و عينة الدم بلطف و حرص لخلط المحتويات.
2)   اسحب الدم من العبوة الى الانبوب الشعري الى ارتفاع ثلاثة ارباع.
3)   أو يمكن سحب الدم مباشرة الى انبوب شعري محتوي على الهيبارين.
4)   امسح السطح الخارجي للانبوب.
5)   بوضع اصبعك على اعلى الانبوب الشعري، احكم سداد اسفل الانبوب عن طريق ادخاله في مادة خاصة مثل cristaseal و لف الانبوب بلطف عند اخراجه.
6)   ضع الانبوب في جهاز الطرد المركزي بحيث يكون الغطاء البلاستيكي متجها للخارج (او باتجاه القعر) و ثبته في مكانه عن طريق ركنه على القطعة المطاطية داخل الجهاز، هذه القطعة تتواجد في معظم اجهزة الطرد المركزي.
7)   وازن الجهاز عن طريق وضع انبوب مقابل يحتوي على نفس الكمية من السائل.
8)   احكم اغلاق غطاء الامان و من ثم احكم اغلاق غطاء الجهاز.
9)   شغل الجهاز لمدة 5 دقائق على سرعة 10000 دورة في الدقيقة.
10)                   ارفع الانبوب من الجهاز و قم بقياس PCV باستخدام مقياس microhaematocrit .

قراءة ال PCV :

1)   ضع الانبوب في الاخدود الموجود على القارئ (او على بطاقة القياس الخاصة).
2)   ضع اعلى السدادة البلاستيكية (تتوافق مع اسفل طبقة ال RBC ) في مستوى موازي لاسفل القارئ.
3)   حرك الانبوب بحيث تتوافق اعلى طبقة البلازما مع الخط الاعلى المائل في اعلى القارئ.
4)   اذا استخدمت قارئ من نوعية slide reader ، فيجب ان تحرك ال slide بحيث يصبح في مستوى موازي لاعلى طبقة كريات الدم الحمراء.
5)   الآن يمكن اخذ القراءة على التدريج على الجانب الايمن.  هذه القراءة هي نسبة PCV .
في حالة عدم توفر قارئ ل microhaematocrit ، يمكن حساب نسبة PCV عن طريق قياس ارتفاع طبقة كريات الدم الحمراء و الارتفاع الكلي لعينة الدم كالتالي:
PCV  =     ارتفاع طبقة كريات الدم الحمراء
                     الارتفاع الكلي لعينة الدم

2. تقدير كمية البروتين الكلي:

يمكن استخدام جهاز ال refractometer لقياس البروتين الكلي (albumen ، globulin و fibrinogen ) في المصل او في الدم.  يساعد هذا على اعطاء فكرة عن درجة التميه في الحيوان، كما يساعد على تشخيص الحيوانات التي تعاني من فقدان البروتين ( نتيجة لسوء التغذية، عدوى الطفيليات الشديد أو امراض الكبد و الكلية).

الطريقة المتبعة:

يمكن اخذ الدم في انبوب عادي او حتى يمكن ترك العينة في الحقنة.  بعد وضع العينة جانبا لمدة 15 دقيقة، تؤخذ قطرة من المصل و توضع في منشور جهاز ال refractometer .  راجع الارشادات السابقة ذكرها عن معايرة الجهاز.

ملاحظة مهمة:
                              I.      اذا كان الحيوان يعاني من انخفاض البروتين في الدم (severe cachexia اوhepatic insufficiency ) و في نفس الوقت يعاني من النشفان، سوف تكون نتيجة الفحص سلبية (كما لو كان الحيوان لا يعاني من اي مشكلة).
                           II.      اذا كان الحيوان يعاني من الالتهاب المزمن، سوف يعاني ايضا من ارتفاع نسبة ال fibrinogen و بالتالي ارتفاع البروتين الكلي حتى لو كان لا يعاني من النشفان.
لذلك من المهم عند تقييم نتائج هذه الفحوص تقييم كلا الفحصين في نفس الوقت: البروتين الكلي و PCV.

3. لطخة الدم المصبوغة:

تحضر عينات من لطخة الدم و تصبغ بصبغات مختلفة حتى يمكن رؤية كريات الدم و فحصها و ايضا للبحث عن طفيليات الدم.  تعطي هذه الفحوص معلومات عن عدد و صحة هذه الخلايا.  تفحص كريات الدم الحمراء لتقييمها من ناحية الحجم و الشكل و اللون و محتويات داخل الخلية.  تفحص صفائح الدم لتقييمها من ناحية العدد و للبحث عن تكثف الصفائح مما قد يفسر انخفاض عدد الصفائح في الدم.
من المهم الحصول على تحضيرة جيدة لعينة لطخة الدم بحيث تتكون من طبقة واحدة من الخلايا السليمة غير المتكسرة.
تفحص عينات لطخة الدم تحت المجهر تحت الزيت.

المعدات:

·   سلايد خاص بالمجهر.
·   آلة خاصة لبسط اللطخة.
·   عينة الدم في انبوب يحتوي على مانع التجلط EDTA  .
·   كحول.
·   انبوب شعري.
·   مناديل و كفوف خاصة للاستعمال لمرة واحدة.

الطريقة المتبعة:

1)   امسح السلايد بالكحول لازالة الاوساخ و تأكد من نشفان سطحه.
2)   استخدم انبوب شعري لسحب كمية صغيرة من عينة الدم السابق مزجها جيدا مع مانع التجلط EDTA  .
3)   ضع قطرة صغيرة من عينة الدم على طرف السلايد.
4)   ضع سلايد آخر (كآلة خاصة لبسط اللطخة) فوق السلايد بزاوية 45 º و اسحبه باتجاه قطرة الدم حتى يلامسها.
5)   مدد قطرة الدم على سطح السلايد بحيث تحصل على لطخة الدم المكونة من طبقة واحدة من الخلايا.
6)   اسمح للطخة بالنشفان في هواء الغرفة.

ملاحظة مهمة:
                                                      I.      يجب ان تكون السلايدات المستخدمة في هذا الفحص نظيفة و خالية من الاوساخ الدهنية أو الغبار، و ألا ظهرت هذه في اللطخة على شكل بقع و نقاط مما يفسد العينة.
                                                   II.      استخدم قطرة صغيرة من الدم فقط لمنع تكون طبقة سميكة من اللطخة.
لطخة الدم الطرفية (peripheral ):
1)   امسح منطقة سحب عينة الدم بالكحول لتعقيمها (تكون هذه عادة على سطح الاذن الخارجية).
2)   انكش الجلد باستخدام ابرة و انتظر حتى تظهر قطرة من الدم في الموقع.
3)   ارفع قطرة الدم باستخدام السلايد الزجاجي و حضر اللطخة على سلايد آخر كما سبق ذكره.
صبغ لطخة الدم:
تكون قطرة الدم جاهزة للصباغة ما ان تنشف في هواء الغرفة، و يمكن صباغتها باي من الطرق التالي ذكرها.  أذا لم تتم صباغة لطخة الدم فورا، يجب تثبيتها في كحول الميثانول في اسرع وقت لحفظ العينة حتى تتوفر الاسباب لصباغتها في وقت لاحق.

المعدات:

·   صحن خاص للصباغة.
·   مسند خاص للصباغة.
·   الصبغات الخاصة.
·   ماء مقطر.
·   مناديل و كفوف خاصة للاستعمال لمرة واحدة.
صبغة Diff Quick أو صبغة Rapi Diff :
يكثر استعمال صبغة Diff-quick حيث يسهل استخدامها لكن
الطريقة المتبعة:
1)   ثبت العينة على السلايد بتغطيسه في محلول الكحول (ميثانول) 5 مرات.
2)   ارفع السلايد من المحلول الأول و غطسه في المحلول الثاني (صبغة ايوسين) 5 مرات.
3)   ارفع السلايد من المحلول الثاني و غطسه في المحلول الثالث (صبغة ثياسين) 5-7 مرات.
4)   اغسل السلايد بالماء المقطر و ضع السلايد بالوضع العامودي و اتركه في الهواء الطلق حتى ينشف.
صبغة جيسما Giesma :
تستخدم صبغة جيسما في صباغة طفيليات الدم، spirochaetes و rickettsias .  كما يمكن استخدامها ايضا في صباغة عينات لطخة الدم و في فحوصات الخلايا cytology .
الطريقة المتبعة:
1)   ثبت العينة على السلايد بتغطيسه في محلول الكحول (ميثانول) 5 لعدة دقائق.
2)   ضع السلايد في حمام من الصبغة و اتركه لمدة نصف ساعة.
3)   يمكن ترك السلايد في حمام الصبغة لفترة اطول حسب الحاجة للحصول على افضل النتائج.
4)   اغسل السلايد بالماء المقطر و ضع السلايد بالوضع العامودي و اتركه في الهواء الطلق حتى ينشف.
صبغة ليشمانس Leishmans :
تستخدم صبغة ليشمانس في فحوصات الدم لانها تظهر الخلايا بوضوح و تحديد عال.  كما انها اسرع من صبغة جيسما في اظهار النتائج.
الطريقة المتبعة:
1)   اغمر العينة على السلايد في صبغة ليشمانس لمدة دقيقتين.
2)   اضف ضعف حجم العينة من الماء المقطر المحتوي على البفر buffered distilled water ذا درجة pH = 6.8 .
3)   حرك السلايد بلطف جانبيا لخلط المحاليل.
4)   اترك السلايد جانبا لمدة 10 الى 15 دقيقة.
5)   اغسل السلايد بالماء القطر المحتوي على البفر لمدة دقيقة حتى تظهر اول ملامح اللون الزهري.
6)   ضع السلايد بالوضع العامودي و اتركه في الهواء الطلق حتى ينشف.

4. تعداد و تركيز انواع كريات الدم البيضاء في العينة:

يمكن استخدام عينات لطخة الدم المصبوغة لفحص و عد كريات الدم البيضاء.  تكمن اهمية هذا الفحص في تقدير اعداد الانواع المختلفة من كريات الدم البيضاء (على شكل نسبة مئوية) في العينة.

المعدات:

·   لطخة الدم المصبوغة.
·   الزيت الخاص المستخدم في الفحص المجهري.
·   مجهر.
·   ورقة و قلم.

الطريقة المتبعة:

1)   حضر لطخة الدم المصبوغة كما سبق و اصبغها بصبغة ليشمانس او صبغة Diff Quick .
2)   افحص العينة بالمجهر تحت التكبير الصغير و لاحظ نوعية العينة و الصبغة و عدد الخلايا.
3)   افحص طرف العينة لتقييم عدد و نوعية كريات الدم البيضاء.  كريات الدم البيضاء اثقل وزنا من بقية مكونات الدم و بالتالي تسحب الى طرف السلايد.
4)   اختار منطقة قريبة من طرف السلايد للفحص و ضع نقطة من الزيت الخاص بالمجهر.
5)   ضع العدسة الشيئية بالوضع الصحيح و استخدم طريقة battlement لعد 100 من كريات الدم البيضاء و سجل عدد كل نوع منها.
طريقة Battlement :
بدلا من عد كل نوع من الخلايا، تستخدم عادة طريقة Battlement لتغطية منطقة كافية من السلايد لتجنب الاخطاء.
حرك المنطقة المعدودة مرتين بالاتجاه العلوي، مرتين الجانب و مرتين الى اسفل ... الخ.
استمر في العد حتى تعد 100 من كريات الدم البيضاء.
سجل عدد كل نوع من كريات الدم البيضاء و حولها الى نسبة مئوية.

ملاحظة مهمة:
من الاهمية بمكان معرفة العدد الكلي لكريات الدم البيضاء حتى تكون هناك فائدة من هذا الفحص.

5. فحوصات الدم الأخرى:

تحضير و فحص لطخة الدم من العوامل المهمة في البحث العلمي المختص بطفيليات الدم مثل trypanosoma و babesias .
تحضر لطخة الدم كما سبق ذكره و تصبغ بصبغة Diff Quick  أو صبغة جيسما.  فحص لطخة الدم قد يكشف عن التالي:
طفيليات trypanosomes : طفيليات الدم الخارجية شبيهة بالسوط.
طفيليات babesias : طفيليات الدم الداخلية.  تتواجد هذه داخل كريات الدم الحمراء باشكال مختلفة حسب فصيلة الحيوان المصاب.
طفيليات anaplasmas : طفيليات الدم الداخلية.   تتواجد هذه داخل كريات الدم الحمراء.
طفيليات borellias (spirochetes) : طفيليات الدم الخارجية اللولبية و تتواجد ما بين كريات الدم الحمراء.
                Intracellular parasites

                               Trypanosomes

ليست هناك تعليقات:

إرسال تعليق