الاثنين، 21 نوفمبر، 2016

صبغ أفلام الدم ‎

صبغ أفلام الدم
تعتبر أصباغ رومانوفسكي مستخدمة عالميًا في الصبغ النمطي لأفلام الدم ويمكن من خلالها الحصول على نتائج مرضية.
جفف الفلم في الهواء ثم اغمر الشريحة في الصبغة.‎ بعد مرور دقيقتان ضاعف كمية المياه ثم قم بصبغ الفلم لمدة من 5 إلى 7 دقائق. ثم قم بغسل الفلم في ماء منظم متدفق حتى يكتسب لونًا قرنفليًا خفيفًا (لمدة تصل حتى دقيقتين). بعد أن يتم تنظيف الجزء الخلفى من الشريحة قم بتجهيزها على الفور للتجفيف.
عندما يتم صبغ مجموعات متعددة من الأفلام بشكل متتالي فيجب تجديد محلول الصبغ عند الفواصل الزمنية (على سبيل المثال بعد كل 50 شريحة)‎. عادة ما يكون فقدان الصبغ لقوته ناتج من ترسب الإيوزين إبسيلون (eosin Y) وسوف ينتج عن ذلك نوى ملونة بالأزرق بدلا من الأرجواني.
قم بعمل عملية عد شديدة الدقة للصفيحات لتحديد التركيز التقريبي وأضف كمية مناسبة من المستعلق إلى الدم المحفوظ. اخلط جيدًا لمدة 20 دقيقة، ومع الخلط المستمر، قم بالتوزيع على حاويات معقمة. قم بتغطية الحاويات وختمها. عند درجة حرارة 4 مئوية، يجب أن تتضمن عملية التحضير عمر تخزيني يتراوح من 3 إلى 4 أشهر. وقبل الاستخدام، أعد التعليق عن طريق رج الحاوية بالكامل باليد، يليها خلط ميكانيكي لمدة 15 دقيقة تقريبًا.

اختبار كومبس أو ضد الغلوبولين

ربما يكون اختبار ضد الغلوبولين على الأرجح هو الاختبار الأهم في علم الأمصال وأعمال بنك الدم. تم تقديم اختبار ضد الغلوبولين )اختبار كومبس) بواسطة كومبس ومورانت وريس في عام 1945 كطريقة للكشف عن الأجسام المضادة Rh "الغير مكتملة" (على سبيل المثال الأجسام المضادة IgG التي تكون قادرة على جعل الخلايا الحمراء ذات حساسية ولكنها غير قادرة على إحداث تراص لنفس الخلايا التي يتم تعليقها في المحلول الملحي) على عكس الأجسام المضادة IgM التي تحدث تراص للخلايا الحمراء المعلقة في المحلول الملحي.‎ وينقسم اختبار كومبس إلى اختبارات ضد الغلوبولين المباشرة وغير المباشرة:
v                 من خلال اختبار ضد الغلوبولين المباشر (DAT)، يتم فحص خلايا المريض، بعد الغسل الدقيق، لتحديد التحسيس الحادث في الجسم الحي.‎
v                 من خلال اختبار ضد الغلوبولين غير المباشر (IAT) يتم تحضين الخلايا الحمراء الطبيعية مع مصل يشتبه في احتوائه على جسم مضاد وبالتالي يتم فحصها، بعد الغسل، لتحديد الجسم المضاد المرتبط في المختبر.‎
يتم استخدام اختبار DAT لإظهار ارتباط الأجسام المضادة بالخلايا الحمراء في الجسم الحي كما هو الحال في فقر الدم الانحلالي ذاتي المناعة، ومرض تحال الدم الوليدي المنيع للمستضد الخيفي وجميع أمراض حل الدم ذات المنيع للمستضد الخيفي والتي تحدث بعد عملية نقل دم غير متوافقة.‎
يحظي اختبار IAT بتطبيق واسع في علم الأمصال الخاص بنقل الدم ويشمل فحص الجسم المضاد وتحديده واختبار التوافق.
اختبار ضد الغلوبولين المباشر (DAT):
يوصى باستخدام تقنية الأنبوب الدوار عند إجراء اختبار ضد الغلوبولين الروتيني.
يجب أن يتم إجراء الاختبار في أنابيب زجاجية. لا ينصح باستخدام أنابيب بلاستيكية لأنها قد تمتز IgG وهو ما قد يؤدي إلى إبطال مفعول مضادات IgG الخاصة بكاشف ضد الغلوبولين. استخدام عينة دم في مضاد التخثر EDTA.
إذا كان هناك جسم مضاد ذاتي مستجيب للبرودة فإن خلايا المريض الحمراء يجب أن يتم غسلها ثلاث مرات في كمية كبيرة من محلول ملحي دافئ عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لإزالة الأجسام المضادة الباردة والحصول على تعليق مستو للخلايا.
لا توجد مخاطرة في إزالة المكونات التكميلية الممتزة. على الرغم من ذلك يجب أن تتم عملية الغسيل على نحو سريع بقدر المستطاع ويجب أن يتم إجراء الاختبار فورًا بعدها وذلك لأن الجسم المضاد الدافئ المقيد قد يستخلص أحيانًا الخلايا عندما تكون مغسولة وقد يتم الحصول  على نتائج سلبية مغلوطة.  "المحلول الملحي" يشير إلى 9 جم/لتر من كلوريد الصوديوم منظم بنسبة 7 pH.                                                         
طريقة اختبار (DAT ):قم بتعليق 5% من الخلايا الحمراء التي تم غسلها ثلاث مرات في المحلول الملحي. إذا لم يتم غسل الخلايا الحمراء كما ينبغي فقد يتم إبطال مفعول المصل المضاد لغلوبولين البشر بواسطة الغلوبولين المناعي أو أحد المكملات في محيط مصل الدم أو البلازما ويسبب نتيجة سلبية مغلوطة.
أضف قطرة واحدة من مستعلق الخلايا إلى نقطتين من كاشف الغلوبولين المضاد للبشر. يتم التنبيذ لمدة دقيقة واحدة بقوة g150
افحص وجود تراص بعد إعادة تعليق زر الخلايا بلطف. وجود مرآة مقعرة وضوء جيد يساعد على القراءات المجهرية. إذا كانت النتائج سلبية فقم بالتأكد من ذلك مجهريًا.

4.3.12 مجموعة فئات الدم ABO وRH

يستخدم الاختبار في تحديد فئة الدم ABO ومجموعة Rh
المواد
1-  شريحة
2-  أمصال Anti-A أحادية النسيلة
3-  أمصال Anti-B أحادية النسيلة
4-  أمصال Anti-D أحادية النسيلة
5-  عينة دم مخففة بواسطة EDTA
الطريقة
1-  أضف قطرة واحدة من كل مصل من الأمصال المضادة الملونة على الشريحة
2-  لكل مصل من الأمصال المضادة أضف قطرة واحدة من الدم المخفف بواسطة EDTA
3-  امزج الدم بالأمصال المضادة
4-  قم بتدوير الشريحة باليد لعدة مرات ثم اقرأ النتيجة في فترة من 2 إلى 5 دقائق
5-  سجل النتيجة
6-  إذا كان Rh سلبي قم باختبارها بواسطة طريقة الأنبوب:
A.أضف كمية من أمصال antiD إلى أنبوب الاختبار.
B. أضف كمية بنسبة 2% من مستعلق الخلايا الحمراء.
C. امزج المستعلق عن طريق رج الأنبوب.
D.اترك المستعلق مثبت لمدة 15 دقيقة ثم اقرأ النتيجة.

التناقضات
A-                       إيجابية كاذبة
1-  تشكل النضائد
2-  فقر الدم الانحلالي ذاتي المناعة
B-سلبية كاذبة
تظهر عندما تكون الأمصال المضادة ضعيفة أو منتهية الصلاحية 


ليست هناك تعليقات:

إرسال تعليق